課題2　土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù)

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1、1．將接種后的培養(yǎng)基和一個未接種的培養(yǎng)基都放入37℃恒溫箱的目的是(　　)。A．對比觀察培養(yǎng)基有沒有被微生物利用B．對比分析培養(yǎng)基上是否生有雜菌C．沒必要放入未接種的培養(yǎng)基D．為了下次接種時再使用解析　通過設(shè)計對照實驗，目的是為了檢測培養(yǎng)基制備是否成功，即是否被污染了。答案　B2．可以鑒定出分解尿素的細(xì)菌的方法是(　　)。A．以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑B．以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入二苯胺試劑C．以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入剛果紅試劑D．以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入雙縮脲試劑解析　尿素在尿素分解菌的作用下分解產(chǎn)生氨和CO2，氨會使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)，pH升

2、高，酚紅指示劑變紅。答案　A3．下列關(guān)于微生物分離和培養(yǎng)的有關(guān)敘述，錯誤的是(　　)。A．微生物培養(yǎng)前，需對培養(yǎng)基進(jìn)行消毒B．測定土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)目，常用菌落計數(shù)法C．分離土壤中不同的微生物，要采用不同的稀釋度D．分離能分解尿素的細(xì)菌，要以尿素作為培養(yǎng)基中唯一的氮源解析　微生物培養(yǎng)前，需對培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，而不是消毒；測定土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)目，常用菌落計數(shù)法而一般不用活菌計數(shù)；分離土壤中不同的微生物，要采用不同的稀釋度以便能從中選擇出菌落在30～300間的平板進(jìn)行計數(shù)；分離能分解尿素的細(xì)菌，要以尿素作為培養(yǎng)基中唯一的氮源。答案　A4．下列說法錯誤的是(　　)。A．因為土壤中

3、各類微生物的數(shù)量不同，所以為獲得不同類型的微生物，要按不同的稀釋倍數(shù)進(jìn)行分離B．測定土壤中細(xì)菌的總量和測定土壤中能分解尿素的細(xì)菌的數(shù)量，選用的稀釋范圍不同C．只有得到了3個或3個以上菌落數(shù)目在30～300的平板，才說明稀釋操作比較成功，并能夠進(jìn)行菌落的計數(shù)D．牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的菌落數(shù)明顯大于選擇培養(yǎng)基的數(shù)目，說明選擇培養(yǎng)基已篩選出一些細(xì)菌菌落解析　樣品的稀釋度直接影響平板上生長的菌落數(shù)目，土壤中各類微生物數(shù)量不同，含量最多的是細(xì)菌，大約占70%～90%，其次是放線菌，最少是真菌，所以為獲得不同類型的微生物，再按不同稀釋倍數(shù)進(jìn)行分離；在同一稀釋度下只要得到兩個或兩個以上的菌

4、落數(shù)目在30～300的平板，就說明稀釋操作比較成功，并能夠進(jìn)行菌落的計數(shù)；驗證選擇培養(yǎng)基是否具有選擇作用，需設(shè)立牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作為對照，若后者上的菌落數(shù)明顯大于前者，說明前者具有篩選作用。答案　C5．下面是對大腸桿菌進(jìn)行數(shù)量測定的實驗，請回答有關(guān)問題。(1)制備稀釋倍數(shù)為102、103、104、105、106的系列稀釋液。(2)為了得到更加準(zhǔn)確的結(jié)果，選用適宜的方法接種樣品：下圖是利用______法進(jìn)行微生物接種，把聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面，為達(dá)到這一目的，操作上應(yīng)注意______________________。(3)適宜溫度下培養(yǎng)。結(jié)果分析：①一同學(xué)在稀

5、釋倍數(shù)為105的培養(yǎng)基中測得平板上菌落數(shù)的平均值為32.4個，那么每毫升樣品中的細(xì)菌數(shù)是(接種時所用稀釋液的體積為0.1mL)______個。②用這種方法所得的數(shù)量比實際活菌數(shù)量要______，因為________________________________________________________________。(4)在微生物培養(yǎng)操作過程中，為防止雜菌污染，操作者的雙手需要進(jìn)行清洗和______；已滅菌的材料用具應(yīng)避免_________________________。(5)培養(yǎng)大腸桿菌時，在接種前需要檢測培養(yǎng)基是否被污染。對于固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測方法是__

6、____。解析　(2)題圖為平板劃線法分散培養(yǎng)基表面的菌種，操作時應(yīng)注意保持無菌，第二次及以后每次劃線前接種環(huán)要灼燒，冷卻后從上一區(qū)劃線末端開始劃，首尾區(qū)不重疊以便于分散菌種。(3)①根據(jù)公式每克樣品中菌株數(shù)＝(C÷V)×M，知：每毫升樣品中菌株數(shù)為×105＝3.24×107。②由于當(dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落，因此，統(tǒng)計結(jié)果往往少于實際菌株數(shù)。(4)操作者雙手用酒精消毒；已滅菌的材料應(yīng)避免與周圍物品接觸，防止再次被污染。(5)接種前檢測培養(yǎng)基是否被污染可將未接種的培養(yǎng)基倒置在適宜溫度下培養(yǎng)，觀察培養(yǎng)基是否有菌落出現(xiàn)，若無則未被污染，若有則已被污染

7、。答案　(2)平板劃線　第二次及以后每次劃線前接種環(huán)要灼燒，冷卻后從上一區(qū)劃線末端開始劃，首尾區(qū)不重疊(3)①3.24×107?、谏佟‘?dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時，平板上觀察到的是一個菌落(4)消毒　與周圍的物品接觸(5)將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下倒置培養(yǎng)適宜的時間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生課堂小結(jié)