靈芝多糖的研究

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1、靈芝多糖的研究摘要:靈芝多糖是靈芝屮的主要冇效成分。本研究對靈芝多糖的分離和純化方法作了闡述，對其化學(xué)結(jié)構(gòu)作了初步分析，并且對工業(yè)發(fā)酵方法生產(chǎn)的三種靈芝菌粉與相應(yīng)的野生或栽培的靈芝子實體進行了靈芝多糖含量方面的比較從而說明，利用現(xiàn)代發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)靈芝菌粉將很有希望成為以后生產(chǎn)靈芝的一種主要方法。關(guān)鍵詞：靈芝多糖;發(fā)酵靈芝菌粉;野生靈芝;栽培靈芝中圖分類號：S567.3+1文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A引言靈芝的概述靈芝隸屬于真菌界，擔(dān)子菌綱，無褶菌目，猴椅菌科，萬年茸(靈芝)屬。學(xué)名為Ganodermafucldlum(Fr.

2、)Karsto它是觀賞、醫(yī)藥兼用的菌類。山于整個菇體木化，可長久保存不腐敗，故有〃萬年菌〃Z稱。1.靈芝的保健作用靈芝是我國傳統(tǒng)的扶正固本，滋補強壯的中藥，歷代醫(yī)書均將之列為屮藥上品。早在2千多年前的春秋戰(zhàn)國時期《列子，湯問》列御寇屮云“朽壤之一，有菌之者”，并總結(jié)當(dāng)時利于靈芝治病保健的經(jīng)驗：“煮百沸其味清芳，飲之明目,腦清，心靜，腎堅，其寶物也”。［1］最早的醫(yī)學(xué)著作《神農(nóng)草經(jīng)》把靈芝列為上品，謂其“久味苦平，主治中結(jié)，益心氣，補中，增智慧，不忘，久服輕身不老”。李時珍的《本草綱冃》中對靈芝藥性和功效作了詳

3、盡的記述:赤芝，苦平無毒，主治中結(jié),益心氣，補中，增智慧，不忘；紫芝，甘溫?zé)o毒，好顏色，治虛虜，治痔。[2]現(xiàn)代藥理和臨床研究證明，靈芝屮迄今已分離到150余種化合物，但多數(shù)藥理活性與靈芝多糖有關(guān)。活性多糖是一種具有某些特殊生理功能的多糖類高分子化合物，廣泛存在于植物，動物和微生物組織中。近年來，多糖結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系以及多糖復(fù)合物疫苗等研究在國際上受到了較多關(guān)注。靈芝多糖主要以下生理功能：（1）調(diào)節(jié)免疫功能（2）抗腫瘤作用（3）促進體內(nèi)核酸與蛋白質(zhì)的代謝（4）抗氧自由基作用（5）靈芝多糖有鎮(zhèn)定作用，強心作用和

4、提高實驗動物耐受常壓缺氧的能力等其他功能1.實驗的材料和方法2.1材料泰山赤芝T-1,韓國靈芝K-1,口本靈芝J-1?三種靈芝菌種均為山東萊蕪農(nóng)科所保存品種。2.2發(fā)酵培養(yǎng)基釆用當(dāng)前靈芝發(fā)酵行業(yè)最常用的發(fā)酵培養(yǎng)基配方之一：蔗糖4%,KH2P040.15%,MgS04*7H200.075%,（NH4）2S040.05%,CaCO30.1%,消泡劑適量。2.3試劑乙醇，葡萄糖，蔥酮，乙酸乙酯，濃硫酸等。2.4儀器德國貝朗公司所生產(chǎn)的Biostat-MD型10L全自動發(fā)酵罐。722G可見分光光度計及其它實驗室常用小

5、儀器。2.5實驗方法2.5.1靈芝菌絲體的培養(yǎng)過程將新培養(yǎng)的斜面母種轉(zhuǎn)入種子培養(yǎng)基，28度培養(yǎng)7天，鏡檢無雜菌后,按5%的量接種到發(fā)酵罐內(nèi)，發(fā)酵5~6人，發(fā)酵液殘?zhí)窃?%左右結(jié)束培養(yǎng)。2.5.2靈芝多糖的分離和純化2.5.2.1清液胞外多糖的提取工藝流程：發(fā)酵液離心發(fā)酵上清液濃縮濃縮液透析透析液濃縮濃縮液離心上清液乙醇沉淀沉淀物干燥胞外粗多糖2.5.2.2菌絲體胞內(nèi)多糖的提取工藝流程：工藝流程：發(fā)酵液離心發(fā)酵上清液濃縮濃縮液透析透析液濃縮濃縮液離心上清液乙醇沉淀沉淀物丁燥胞外粗多糖2.5.2.3粗多糖的純化工

6、藝流程：粗多糖脫蛋白脫蛋白多糖層析洗脫含糖部分層析洗脫多糖純品2.6分析方法2.6.1多糖的純度鑒定采用聚丙烯酰胺凝膠電泳和凝膠過濾法進行檢查純度。2.6.2靈芝多糖含量的測定方法:2.6.2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備:準(zhǔn)確配制0.1000%葡萄糖儲備液及0.2000蔥酮-已酸已脂顯色劑。分別取1.00,2.00,3.00,4.00,5.00ml儲備液,用水分別定容至25ml后，在分別取0.50ml,加入干燥的10ml具塞試管屮,在加入4.00ml濃硫酸，搖勻。5min后加1.00ml顯色劑,100°C水浴加熱lOm

7、in,取出，冷卻至室溫后，以濃硫酸為空白對照，722G可見分光光度計在600nm處，測吸光度值，計算其標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程。2.6.2.2換算因素的測定：純靈芝多糖樣品從日本獲得。精確稱取60.Omg,水溶解后定容至100ml,取4.00ml水定容至10ml。得多糖供試液，精確稱取0.50ml,按（1）中方法顯色，測定吸光度值，代入標(biāo)準(zhǔn)回歸方程求出供試液的葡萄糖含量，以f二W1/W2計算因素f（Wl為供試液中多糖實際重量，W2為測定出的糖含量）。2.6.2.3樣品溶液的制備：取待測樣品適量，80%乙醇回流4h,過

8、濾,濾渣用水回流2h。合并兩次濾液，濾液冷卻至室溫后定容至100ml,取30ml,用水定容至10ml,得樣品溶液。2.6.2.4多糖含量測定：取樣品溶液0.50ml,按1項方法顯色，測定吸光度值，代入回歸方程，求多糖含量：多糖%=cXdXf/w0c:樣品濃度；d:樣品稀釋倍數(shù)；f:換算因素；w:樣品重量。2.6.3發(fā)酵靈芝菌粉的獲得分別以三種靈芝菌種作為液體深層發(fā)酵的菌種，在10L全自動發(fā)酵罐中配好