【精品】分離放線菌論文1

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1、一、摘要篩選放線菌是新抗研究的重要課題之一。迄今為止，已發(fā)現(xiàn)的抗生素有80%皆來(lái)自于放線菌。放線菌主要存在于土壤中，并在土壤中占有相當(dāng)大的比例。一般地，放線菌在比較干燥、偏堿性、含有機(jī)質(zhì)豐富的土壤屮數(shù)量居多。通常，隨著地理分布、植被及土壤性質(zhì)的不同，放線菌的種類、數(shù)量和拮抗性也各不相同。土壤是微生物的大本營(yíng)，其中的放線菌多以鏈霉菌為主，因此人們通常將除鏈霉菌以外的其它放線菌統(tǒng)稱為稀有放線菌。采用加熱處理土樣、選用特殊培養(yǎng)基或添加某種抗生素等方法時(shí)，均可提高稀有放線菌的獲得率。結(jié)果表明：在此方法下可以成功培養(yǎng)出放線菌。二、關(guān)鍵詞：放線菌、高氏一號(hào)培養(yǎng)基、預(yù)處理、抑制劑。放線菌與人類的生產(chǎn)和生活關(guān)

2、系極為密切，目前廣泛應(yīng)用的抗生素約70%是各種放線菌所產(chǎn)生。一些種類的放線菌還能產(chǎn)生各種酶制劑（蛋白酶、淀粉酶、和纖維素酶等）、維生素和有機(jī)酸等。弗蘭克菌屬為非豆科木本植物根瘤中有固氮能力的內(nèi)共生菌。此外，放線菌還可用于笛體轉(zhuǎn)化、坯類發(fā)酵、石油脫蠟和污水處理等方面。少數(shù)放線菌也會(huì)對(duì)人類構(gòu)成危害，少數(shù)放線菌也會(huì)對(duì)人類構(gòu)成危害，引起人和動(dòng)植物病害。因此，放線菌與人類關(guān)系密切，在醫(yī)藥工業(yè)上有重要意義?，F(xiàn)有的放線菌分離培養(yǎng)基多達(dá)30余種，放線菌資源調(diào)查待分離土樣數(shù)量很大，培養(yǎng)基種類過(guò)多將加大分離工作量，故篩選幾種出菌率高、能將土壤中絕大多數(shù)種類放線菌分離培養(yǎng)出的代表性培養(yǎng)基，可在保證獲得絕大部分放線菌

3、資源信息的情況下，有效減少工作量，是當(dāng)今放線菌分離的重要課題之…。此外，增加可培養(yǎng)放線菌數(shù)量和抑制雜菌也是建立放線菌有效分離方法面臨的重大問(wèn)題之一。關(guān)于放線菌的分離培養(yǎng)基及雜菌抑制方法我國(guó)許多研究者已進(jìn)行了許多研究，但對(duì)代表性培養(yǎng)基的篩選、提高可培養(yǎng)放線菌數(shù)量及采用理化因子聯(lián)合抑制雜菌的研究報(bào)道不多。放線菌在人工培養(yǎng)基上不生長(zhǎng)的原因很多，例如培養(yǎng)基養(yǎng)分不能滿足某些放線菌的需求導(dǎo)致放線菌抱子不能萌發(fā)等為了分離出更多的未知放線菌，需要不斷改進(jìn)分離方法，以便將傳統(tǒng)方法不可培養(yǎng)的放線菌分離出來(lái)。目前，國(guó)內(nèi)外在放線菌分離方法研究方面已經(jīng)取得了較大的進(jìn)展，可以采用多種物理、化學(xué)刺激以及改變培養(yǎng)基成分等措施

4、，能有效提高稀有放線菌的出菌率，并分離出放線菌的新種屬。例如微波處理法分離放線菌。四、方法：1、實(shí)驗(yàn)材料及器材(1)、實(shí)驗(yàn)材料：采集的土壤材料。(2)、實(shí)驗(yàn)器材：微波爐、電磁爐、干燥箱、玻璃涂鏟、50或100mL量筒(滅菌)、90mm培養(yǎng)皿(滅菌)、1或2mL移液管(滅菌)、標(biāo)簽紙、小玻璃珠(滅菌)、吸耳球，蓋玻片等。(3)、實(shí)驗(yàn)試劑：可溶性淀粉、KNO3、K2HPO4?3H2O>NaCl、FeSO4?7H2O、MgSO4?7H2O、瓊脂、鹽酸、氫氧化鈉、PH試紙、重銘酸鉀。2、實(shí)驗(yàn)步驟(-)采樣1、放線菌的特點(diǎn)、生境分析放線菌以抱子和菌絲片段的形式存在于土壤，每克土壤內(nèi)含有數(shù)萬(wàn)、數(shù)十萬(wàn)的砲了

5、。放線菌的砲了和抱囊抱了在適宜的環(huán)境下吸收水分，膨脹萌發(fā)，生出芽管1—3個(gè)，芽管伸長(zhǎng)長(zhǎng)出分枝，分枝越來(lái)越多，形態(tài)菌絲體。因其菌絲體在培養(yǎng)基內(nèi)，即基內(nèi)菌絲或稱營(yíng)養(yǎng)菌絲體?；鶅?nèi)菌絲體一般沒(méi)有橫隔，由丁?菌絲體長(zhǎng)入培養(yǎng)基內(nèi)和培養(yǎng)基表面，并糾纏在一起形成密集的菌落，所以用接種針將整個(gè)菌落培養(yǎng)基挑起而不破裂?；鶅?nèi)菌絲體向空間長(zhǎng)出的菌絲體叫做氣生菌絲體。在顯微鏡下觀察時(shí)，氣生菌絲體顏色較深，且較基內(nèi)菌絲體粗兩倍左右。氣生菌絲體發(fā)育到一定階段，在它上面形成砲了絲。砲子絲形狀有直、波曲、螺旋、輪生之分。螺旋有松、緊、大、小之分，其螺旋的方向也有左旋與右旋之分，大多數(shù)種為左旋，少數(shù)為右旋。螺旋的數(shù)目也是種的特征

6、之一。砲子具有不同的形狀，有球形、橢球形、桿狀、柱狀，在光學(xué)顯微鏡下就能看清楚。2、采樣方法：土壤中放線菌最豐富，品種齊全，在比較干燥、偏堿性、含有機(jī)質(zhì)豐富的土壤數(shù)量居多。因此在此種環(huán)境隨機(jī)取不同地方厚度約5——10CM處的土壤100克，其中即可有大量放線菌存在。袋裝后待做進(jìn)一步處理。3、樣品處理：對(duì)樣品進(jìn)行風(fēng)干、干熱處理以減少細(xì)菌和真菌的數(shù)量。將上述隨機(jī)取的不同土壤約100g,自然條件下風(fēng)干，顏色由深變淺后碾碎，過(guò)孔徑為840um（20目）的土壤篩（或人工挑取較大的右?；蛲翂K）。用無(wú)菌的報(bào)紙將土樣包好（單層），放到電熱鼓風(fēng)干燥箱屮，60°C干熱處理lho（二）、分離1、原理：原理一，稀釋涂布

7、平板法。如圖：圖1稀釋涂平板法示意圖原理二對(duì)樣品進(jìn)行風(fēng)干、干熱處理以減少細(xì)菌和真菌的數(shù)量。原理三，向培養(yǎng)基添加適量的重銘酸鉀能抑制其他細(xì)菌、真菌的生長(zhǎng)，但不影響放線菌的生長(zhǎng)。2、培養(yǎng)基的設(shè)計(jì)高氏1號(hào)培養(yǎng)基：可溶性淀粉20g,KN03l.Og,K2HPO4?3H2O0.5gNaCl0.5gFeS04?7H2O0.01g,MgSO4?7H2O0.5g,pH7.2—7瓊脂20g水1000mL(1)、配置