放線菌的分離.doc

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1、放線菌的分離（1）注意土樣在用之前要風(fēng)干處理20天以上，以除去大部分的細(xì)菌。（2）注意在培養(yǎng)基中添加重鉻酸鉀適量（1）取體積為300ml的高氏一號(hào)培養(yǎng)基，加入0.1%的重鉻酸鉀15mL，使之終濃度為50ppm，搖勻，倒平板，待用。（2）取土樣5g，攤平于大號(hào)培養(yǎng)皿上，在恒溫干燥箱中120℃干熱處理1h。（3）土樣熱處理后，加入裝有45mL無(wú)菌水和少量玻璃珠的三角瓶中，加入0.5mL的笨酚，室溫下振蕩30分鐘，靜止5分鐘，取上清液用無(wú)菌水稀釋10倍。同時(shí)另取土樣5g，不加熱和笨酚處理，余步驟同上，作為對(duì)照。（4）用移液

2、管分別吸取原液和10倍稀釋液各0.1ml標(biāo)志稀釋倍數(shù)的平板上，涂抹均勻，倒置，28℃培養(yǎng)。（5）培養(yǎng)10~14d，觀察比較不同處理方法的生長(zhǎng)情況、菌落特征。挑取紅色，無(wú)氣生菌絲的小菌落以及其它菌落形態(tài)菌株接種斜面，進(jìn)一步用于形態(tài)觀察和鑒定。高氏一號(hào)培養(yǎng)基配方：可溶性淀粉（20g），KNO3（1g），K2HPO4（0.5g），MgSO4·7H2O（0.5g），NaCl（0.5g），F(xiàn)eSO4·7H2O（0.01g），瓊脂20g，pH=7.4-7.6(1L)關(guān)于LB培養(yǎng)基的問(wèn)題：LB培養(yǎng)基的配方如下:　　胰蛋白胨(Try

3、ptone)10g/L　　酵母提取物(Yeastextract)5g/L　　氯化鈉(NaCl)10g/L　　另外根據(jù)經(jīng)驗(yàn)值用NaOH調(diào)節(jié)該培養(yǎng)基的pH,使其達(dá)到7.4(LB固體培養(yǎng)基倒板　　1.配制：100mlLB培養(yǎng)基加入1.5g瓊脂粉　　2.抗生素的加入：高壓滅菌后，將融化的LB固體培養(yǎng)基置與55℃的水浴中，待培養(yǎng)基溫度降到55℃時(shí)（手可觸摸）加入抗生素，以免溫度過(guò)高導(dǎo)致抗生素失效，并充分搖勻。(抗生素怎么選)　　3.倒板：一般10ml倒1個(gè)板子。培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿后，打開(kāi)蓋子，在紫外下照10-15分鐘。4.保存：

4、用封口膠封邊，并倒置放于4℃保存，一個(gè)月內(nèi)使用改良LB培養(yǎng)基：蛋白胨10g；酵母粉5g；氯化鈉10g；瓊脂，18g；水1000mL；調(diào)至pH7.2～7.4。