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《【精品】微生物常規(guī)鑒定技術(shù)與方法》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、微生物常規(guī)鑒定技術(shù)一、形態(tài)結(jié)構(gòu)和培養(yǎng)特性觀察1、微生物的形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察主要是通過染色，在顯微鏡卜對其形狀、大小、排列方式、細胞結(jié)構(gòu)（包括細胞壁、細胞膜、細胞核、鞭毛、芽抱等）及染色特性進行觀察，出觀地了解細菌在形態(tài)結(jié)構(gòu)上特性，根據(jù)不同微牛物在形態(tài)結(jié)構(gòu)上的不同達到區(qū)別、鑒定微牛物的bl的。2、細菌細胞在固體培養(yǎng)基表而形成的細胞群體叫菌落（colony）o不同微生物在某種培養(yǎng)基中生長繁殖，所形成的菌落特征有很大差異，而同-?種的細菌在一?定條件下，培養(yǎng)特征卻有一定穩(wěn)定性。，以此可以對不同微生物加以區(qū)別鑒定。因此，微生物培養(yǎng)特
2、性的觀察也是微生物檢驗鑒別屮的一項重要內(nèi)容。1）細菌的培養(yǎng)特征包括以下內(nèi)容：在固體培養(yǎng)基上，觀察菌落大小、形態(tài)、顏色（色素是水溶性還是脂溶性）、光澤度、透明度、質(zhì)地、隆起形狀、邊緣特征及遷移性等。在液體培養(yǎng)中的表面牛長情況（菌膜、環(huán)）混濁度及沉淀等。半固體培養(yǎng)基穿刺接種觀察運動、擴散情況。2）霉菌酵母菌的培養(yǎng)特征：人多數(shù)酵母菌沒有絲狀體，在固體培養(yǎng)基上形成的菌落和細菌的很相似，只是比細菌菌落大TL厚。液體培養(yǎng)也和細菌和似，冇均勻生長、沉淀或在液面形成菌膜。霉菌冇分支的絲狀體，菌絲粗長，在條件適宜的培養(yǎng)基里，菌絲無限仲長
3、沿培養(yǎng)基表面蔓延。霉菌的基內(nèi)菌絲、氣牛菌絲和他子絲都常帶有不同顏色，因而菌落邊緣和中心，止面和背面顏色常常不同，如青霉菌：抱子青綠色，氣生菌絲無色，某內(nèi)菌絲褐色。霉菌在固體培養(yǎng)表而形成絮狀、絨毛狀和蜘蛛網(wǎng)狀菌落。一、形態(tài)結(jié)構(gòu)和培養(yǎng)特性觀察1、微生物的形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察主要是通過染色，在顯微鏡下對其形狀、大小、排列方式、細胞結(jié)構(gòu)（包插細胞壁、細胞膜、細胞核、鞭毛、芽他等）及染色特性進行觀察，直觀地了解細菌在形態(tài)結(jié)構(gòu)上特性，根據(jù)不同微生物在形態(tài)結(jié)構(gòu)上的不同達到區(qū)別、鑒定微牛物的目的。2、細菌細胞在固體培養(yǎng)基表而形成的細胞群體叫菌
4、落（colony）o不同微生物在某種培養(yǎng)基中生長繁殖，所形成的菌落特征有很人差異，而同一種的細菌在一定條件下,培養(yǎng)特征卻有一定穩(wěn)定性。，以此可以對不同微生物加以區(qū)別鑒定。因此，微生物培養(yǎng)特性的觀察也是微生物檢驗鑒別屮的一項重要內(nèi)容。1）細菌的培養(yǎng)特征包插以卜內(nèi)容：在固體培養(yǎng)基上，觀察菌落大小、形態(tài)、顏色（色索是水溶性還是脂溶性）、光澤度、透明度、質(zhì)地、隆起形狀、邊緣特征及遷移性等。衣液體培養(yǎng)中的表面牛長情況（菌膜、環(huán)）混濁度及沉淀等。半固體培養(yǎng)基穿刺接種觀察運動、擴散情況。2）雷菌酵母菌的培養(yǎng)特征：大多數(shù)酵母菌沒有絲狀
5、體，在固體培養(yǎng)基上形成的菌落和細菌的很相似，只是比細菌菌落人H厚。液體培養(yǎng)也和細菌相似，有均勻生長、沉淀或在液面形成菌膜。霉菌令分支的絲狀體，菌絲粗長，在條件適宜的培養(yǎng)基?里，菌絲無限伸長沿培養(yǎng)棊表面蔓延。霉菌的基內(nèi)菌絲、氣生菌絲和抱子絲都常帶有不同顏色，因而菌落邊緣和中心，正而和背而顏色常常不同，如青霉菌：抱子青綠色，氣生菌絲無色，基內(nèi)菌絲褐色。霧菌在固體培養(yǎng)表而形成絮狀、絨毛狀和蜘蛛網(wǎng)狀菌落。込叱生民□s!?00、巳十罔悴5T和.192024町］咬股化a-8252€162G昔莽內(nèi)場30A■P.G-革蘭氏染色：革蘭氏
6、染色法是1884年由丹麥病理學(xué)家C.Grain所創(chuàng)立的。革蘭氏染色法可將所佇的細菌區(qū)分為革蘭氏陽性菌(G)和革蘭氏陰性菌(G—)兩大類，是細菌學(xué)上最常用的鑒別染色法。該染色法所以能將細菌分為(T菌和G—菌，是由這兩類菌的細胞壁結(jié)構(gòu)和成分的不同所決定的。G—菌的細胞壁中含有較多易被乙醇溶解的類脂質(zhì)，而且肽聚糖層較薄、交聯(lián)度低，故用乙醇或丙酮脫色時溶解了類脂質(zhì)，增加了細胞舉的通透性，使初染的結(jié)晶紫和碘的復(fù)合物易于滲出，結(jié)果細菌就被脫色，再經(jīng)蕃紅復(fù)染后就成紅色。G1W細胞壁中肽聚糖層厚冃交聯(lián)度高，類脂質(zhì)含量少，經(jīng)脫色劑處理片
7、反而使肽聚糖層的孔徑縮小，通透性降低，因此細菌仍保留初染時的顏色步驟：(1)涂片：涂片方法與簡單染色涂片相同。(2)晾T?:與簡單染色法相同。(3)固定，與簡單染色法相同(4)結(jié)晶紫色染色：將玻片置于廢液缸玻片擱架上，加適量(以蓋滿細菌涂面)的結(jié)晶紫染色液染色1分鐘。(5)水洗：傾去染色液，用水小心地沖洗。(6)媒染：滴加盧哥氏碘液，媒染Imino(7)水洗：用水洗去碘液。(8)脫色：將玻片傾斜，連續(xù)滴加95%乙胛脫色20-25S至流出液無色，立即水洗。(9)復(fù)染:滴加蕃紅復(fù)染5mino(10)水洗：用水洗去涂片上的蕃
8、紅染色液。(11)晾干：將染好的涂片放空氣中晾干或者用吸水紙吸干。(12)鏡檢：鏡檢時先用低倍，再用高倍，最灰用汕鏡觀察，并判斷菌體的革蘭氏染色反應(yīng)性。(1)實驗完畢后的處理：
