【精品】微生物的快速檢測與鑒定

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1、微生物的快速檢測與鑒定微生物論文學(xué)院：食品科學(xué)與工程學(xué)院班級：生工091學(xué)生：彭彩連學(xué)號：42號【關(guān)鍵詞】微牛物快速檢測隨著人們生活水平不斷提高，各種安全問題越來越受到人們的重視，微生物的污染問題也相應(yīng)地備受關(guān)注。在食品和環(huán)境等各個(gè)方面都有微生物污染的可能，一旦污染，微生物將大量繁殖而導(dǎo)致食源性疾病或環(huán)境污染甚至醫(yī)院內(nèi)感染。特別是近年來隨著環(huán)境污染的加劇和生態(tài)平衡的不斷破壞，導(dǎo)致感染的致病菌的種類越來越多，病原微生物對人類的威脅越來越大。傳統(tǒng)的檢驗(yàn)方法，主要包扌舌形態(tài)檢杏和生化方法，其準(zhǔn)確性、靈敏性均較高

2、，但涉及的實(shí)驗(yàn)較多、操作煩瑣、需要時(shí)間較長、準(zhǔn)備和收尾工作繁重，而且要有大量人員參與［1,2］。所以，迫切需要準(zhǔn)確、省時(shí)、省力和省成木的快速檢驗(yàn)方法。木文對微生物快速檢測方法的進(jìn)展情況及實(shí)際應(yīng)用進(jìn)行綜述，以利丁?預(yù)防食源性疾病及公共衛(wèi)生突發(fā)事件的發(fā)生。1即用型紙片法3M公司的perrifilmTMPlate系列微生物測試片，可分別檢測菌落總數(shù)、大腸菌群計(jì)數(shù)、霉菌和酵母計(jì)數(shù)［3］。由RCPScientificInc公司開發(fā)上市的Regdigel系列，除上述項(xiàng)H外還有檢測乳桿菌、沙門氏菌、葡萄球菌的產(chǎn)品［4］

3、,這対個(gè)系列的產(chǎn)品與傳統(tǒng)檢測方法之間的相關(guān)性非常好。如用大腸菌群快檢紙片檢測餐具的表面，操作簡便、快速、省料，特異性和敏感性與發(fā)酵法符合率高，已經(jīng)被列為國標(biāo)方法。使用時(shí)應(yīng)正確掌握操作技術(shù)和判斷標(biāo)準(zhǔn)，從而達(dá)到理想的檢測效果［5］。美國3M公司生產(chǎn)的PF(Petrifilm)試紙還加入了染色齊嘰顯色劑,增強(qiáng)了菌落的FI視效果，而H避免了熱瓊脂法不適宜受損細(xì)菌恢復(fù)的缺陷。霉菌快速檢驗(yàn)紙片，應(yīng)用于食品檢驗(yàn)屮的霉菌具有操作簡便，僅需36°C培養(yǎng)，不需耍低溫設(shè)備；快速，僅需2d就可觀察結(jié)果，比現(xiàn)在的國家標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法縮

4、短3?5d,人人提高了工作效率。紙片法與國標(biāo)法在霉菌檢出率上差片無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,且菌落典型，易判定。紙片熒光法利用細(xì)菌產(chǎn)生某些代謝酶或代謝產(chǎn)物的特點(diǎn)而建立的一種卿_底物反應(yīng)法。只需檢測時(shí)紙片可高壓滅菌處理，4°C保存，簡化了實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備、操作和判斷［6］。但由于它們價(jià)格昂貴，限制了在基層單位的實(shí)際應(yīng)用。2生物化學(xué)技術(shù)2」PCR技術(shù)PCR技術(shù)采用體外酶促反應(yīng)合成特異性DNA片段，再通過擴(kuò)增產(chǎn)物來識別細(xì)菌。由TPCR靈敏度高，理論上可以檢出一個(gè)細(xì)菌的拷貝基因,因此在細(xì)菌的檢測屮只需短時(shí)間增菌甚至不增菌，即可通過PC

5、R進(jìn)行篩選，節(jié)約了大量時(shí)間，但PCR技術(shù)也存在一些缺點(diǎn)：食物成分、增菌培養(yǎng)基成分和其他微生物DNA對Taq酶具有抑制作用，可能導(dǎo)致檢驗(yàn)結(jié)果假陰性；操作過程要求嚴(yán)格，微量的外源性DNA進(jìn)入PCR后可以引起無限放人產(chǎn)生假陽性結(jié)果，擴(kuò)增過程中有一定的裝配誤差，會(huì)對結(jié)果產(chǎn)生影響。曲于以上原因，PCR技術(shù)對操作者的自身素質(zhì)要求很高，對于基層單位而言難以做到。短時(shí)間內(nèi)也不會(huì)有經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益，因此影響了這項(xiàng)技術(shù)在基層的應(yīng)用。2.2基因探針技術(shù)基因探針技術(shù)利用具有同源性序列的核酸單鏈在適當(dāng)條件下互補(bǔ)形成穩(wěn)定的DNAR

6、NA或DNADNA鏈的原理，釆用高度特異性基因片段制備基因探針來識別細(xì)菌?；蛱结樀膬?yōu)點(diǎn)是減少了基因片段長度多態(tài)性所需要分析的條帶數(shù)。如法國生物一梅里埃公司的GENPROBE基因探針檢測系統(tǒng)，對于分離到的單個(gè)菌落，30min完成微生物的確證試驗(yàn)［7］,基因探針的缺點(diǎn)是不能鑒定目標(biāo)菌以外的其他菌。3選擇、鑒定用培養(yǎng)基法在培養(yǎng)基中加入特異性的生化反應(yīng)底物、抗體、熒光反應(yīng)底物、酶反應(yīng)底物等，可使日標(biāo)培養(yǎng)物的選擇、分離、鑒定一次性完成。如生物一梅里埃公司的BP+RPF(兔血漿+纖維蛋白原)培養(yǎng)基，可在24h內(nèi)鑒定

7、金黃色葡萄球菌［8］oMerk公司的chromocultColifoimAgar培養(yǎng)基上，大腸桿菌為墨綠色至紫色菌落，沙門菌為淡綠色至藍(lán)綠色菌落。檸檬酸桿菌和克雷伯桿菌為橙紅色至紅色菌落，其他腸道菌為無色菌落［9］o這個(gè)方法對操作者更求不高，短期培訓(xùn)合格后即可上崗，從而取得一定的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益，應(yīng)用前景十分廣泛。4免疫學(xué)技術(shù)免疫學(xué)技術(shù)通過抗原和抗體的特異性結(jié)合反應(yīng)，再輔以免疫放大技術(shù)來鑒別細(xì)菌。免疫方法的優(yōu)點(diǎn)是樣品在進(jìn)行選擇性增菌后，不需分離，即可采用免疫技術(shù)進(jìn)行篩選。曲于免疫法有較高靈敏度，樣品經(jīng)增

8、菌后可在較短的時(shí)間內(nèi)達(dá)到檢出度，抗原和抗體的結(jié)合反應(yīng)可在很短吋間內(nèi)完成［10］。此技術(shù)對操作者耍求也不髙，是H前為止基層單位應(yīng)用時(shí)間最長最為廣泛的一項(xiàng)快速檢測技術(shù)。如采用免疫磁珠法可有效地收集、濃縮神奈川現(xiàn)象陽性的副溶血性弧菌，可顯著提髙環(huán)境樣品及食品屮病原性副溶血性弧菌的檢岀率［11］o膠體金免疫層析法能快速、靈敏檢測金黃色葡萄球菌［12］，應(yīng)用膠體金免疫層析法檢測乙型肝炎表面抗原，可大大提高工作效率［13］。ATP生物發(fā)光