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《補(bǔ)腎中藥誘導(dǎo)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞成骨分化動物實(shí)驗(yàn)探究》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、補(bǔ)腎中藥誘導(dǎo)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞成骨分化動物實(shí)驗(yàn)探究［摘要］目的通過動物實(shí)驗(yàn)于體外條件下觀察補(bǔ)腎中藥對大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞增殖分化的影響。方法將不同濃度的補(bǔ)腎中藥方劑與骨髓基質(zhì)干細(xì)胞體外共同培養(yǎng)，測定細(xì)胞增殖功能，檢測成骨細(xì)胞增殖與分化指標(biāo)（包括堿性磷酸酶、礦化結(jié)節(jié)）。結(jié)果與空白組比較，濃度100mg/L.200mg/L的補(bǔ)腎中藥在不同時間段均可提高骨髓基質(zhì)干細(xì)胞增殖率（P200um邊界清晰的結(jié)節(jié)，為礦化結(jié)節(jié)的計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)［1］。1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS16.0軟件處理，數(shù)據(jù)以（x±s）表示，多組間采用方差分析，然后行兩兩t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2
2、結(jié)果2.1成骨細(xì)胞的鑒定倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，培養(yǎng)Id后大部分的細(xì)胞為圓形，大小不等漂浮于培養(yǎng)液；培養(yǎng)2d后部分細(xì)胞貼壁，形態(tài)主要為梭形、多角形或紡錘形等幾種形狀（圖1）。培養(yǎng)后7d貼壁細(xì)胞增多可見偽足，瓶底長滿梭形或多角形細(xì)胞（圖2）；10d可見貼壁細(xì)胞形多呈梭形（圖3）ovonKossa染色礦化結(jié)節(jié)（圖4）。2.2補(bǔ)腎中藥方劑對大鼠MSCs增殖的影響如表1所示，在1d時100mg/組高于空白組(t二6.21,P<0.001),且200mg/組也高于空白組(t二10.27,P<0.001),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；在3d時濃度為20mg/
3、L(t=6.89,P<0.001)、40mg/L(t二6.63,P<0.001)、100mg/L(t二14.49,P<0.001)、200mg/L(t二22.21,P<0.001)的0D值均髙于空白組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；在7d時濃度為20mg/L(t=15.39,P<0.001).40mg/L(t二24.36,P<0.001)、100mg/L(t=32.84,P〈0.001)、200mg/L(t=29.80,P<0.001)的0D值均高于空白組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；在10d時濃度為20mg/L(t二38.80,P<0.001)、
4、40mg/L(t=45.13,P〈0.001)、100mg/L(t=37.79,P〈0.001)、200mg/L(t二49.71,P<0.001)的0D值均高于空白組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)o隨著濃度的增高，補(bǔ)腎中藥方劑對大鼠MSCs增殖的影響有促進(jìn)作用。2.3對礦化結(jié)節(jié)數(shù)的影響如表2所示，選取第14天，濃度20mg/L組、40mg/L組、100mg/組、200mg/組的礦化結(jié)節(jié)數(shù)與空白組比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)o說明隨著補(bǔ)腎中藥濃度的提高，其促進(jìn)成骨作用逐步增強(qiáng)。3討論骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞是存在于骨髓中的間充質(zhì)干細(xì)胞，它具有多向分化
5、潛能，能夠自我更新，可在體外培養(yǎng)。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在一定的誘導(dǎo)條件下可以向軟骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、心肌細(xì)胞等多個方向分化［4］。成骨細(xì)胞是體內(nèi)骨形成的主要細(xì)胞也是骨代謝的重要功能細(xì)胞，對維持骨的代謝平衡非常重要［5］。成骨細(xì)胞功能障礙或數(shù)量減少，都會導(dǎo)致骨組織代謝異常、骨質(zhì)疏松等多種疾病的發(fā)生。骨質(zhì)疏松癥在中醫(yī)學(xué)上被認(rèn)為是腎氣虛衰所致，因此近年來越來越多的研究利用補(bǔ)腎中藥來治療骨質(zhì)疏松癥。本研究發(fā)現(xiàn)，不同濃度組的補(bǔ)腎中藥均可促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖，增強(qiáng)堿性磷酸酶的活性。堿性磷酸酶是骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的主要特征性酶，也是最早出現(xiàn)的指標(biāo)
6、，其由成骨細(xì)胞產(chǎn)生并可反映分化程度的高低。目前比較普遍的觀點(diǎn)認(rèn)為，堿性磷酸酶在體外的鈣化中起著關(guān)鍵的作用［6］,堿性磷酸酶活性的高表達(dá)標(biāo)志著成骨細(xì)胞的分化成熟［7］。相較于堿性磷酸酶，礦化結(jié)節(jié)為骨形成的標(biāo)志,它的形成代表了細(xì)胞進(jìn)一步成骨分化成熟［8］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，不同濃度的補(bǔ)腎中藥在不同程度上能刺激骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖分化成骨。傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)認(rèn)為“腎主藏精”，腎精可以生骨養(yǎng)髓的。本方劑所涵蓋的多味補(bǔ)腎中藥中部分作為單味中藥在體外有促進(jìn)向骨髓基質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的作用。殷曉雪等［9］的研究發(fā)現(xiàn)淫羊翟可以上調(diào)BMP-2基因的表達(dá)，促進(jìn)成骨細(xì)胞的增殖和分化。徐展望等
7、［10］的研究發(fā)現(xiàn)補(bǔ)骨脂能促進(jìn)大鼠成骨細(xì)胞的增殖。張立等［11］的研究發(fā)現(xiàn)杜仲也能通過刺激成骨細(xì)胞的增殖分化促進(jìn)骨的重建。此外，Wang等［12］的研究指出骨碎補(bǔ)能促進(jìn)人成骨細(xì)胞增殖作用。本實(shí)驗(yàn)中的補(bǔ)腎中藥是在上述單味補(bǔ)腎藥物的基礎(chǔ)上經(jīng)過組合構(gòu)成，它能夠促進(jìn)大鼠體外骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖及其向成骨細(xì)胞分化。通過本實(shí)驗(yàn)可以發(fā)現(xiàn)，補(bǔ)腎中藥對骨髓基質(zhì)干細(xì)胞增值的影響。在低濃度不但沒有毒害作用，而且隨著濃度的增加,細(xì)胞增值作用遞增。中藥具有誘導(dǎo)分化的作用，和空白組相比(空白組也加入了誘導(dǎo)成骨液)，中藥有誘導(dǎo)基質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化的作用。中期的ALP和細(xì)胞分化成熟晚期
8、的礦化結(jié)節(jié)表明，藥物對細(xì)胞的分化成熟作用明顯，特別是
