淺談芪丹通脈片對急性缺血

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1、淺談英丹通脈片對急性缺血/再灌注大鼠心肌一氧化氮合酶系統(tǒng)的影響【摘要】目的觀察罠丹通脈片對缺血/再灌注大鼠心肌一氧化氮合酶(nitricoxidesynthase,NOS)的影響。方法將雄性SD大鼠隨機分為假手術(shù)組、缺血/再灌注模型組、罠丹通脈片+缺血/再灌注I組、罠丹通脈片+缺血/再灌注II組。大鼠麻醉開胸，結(jié)扎冠狀動脈前降支40mim,再灌注4h。TUNEL法測定大鼠心肌組織的細胞凋亡，化學(xué)比色法檢測心肌組織中總的一氧化氮合酶(NOS)、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)活性，并計算出結(jié)構(gòu)型一氧化氮合酶(cNOS)的活性。結(jié)果不同劑量的罠丹通脈片預(yù)處

2、理抑制缺血/再灌注大鼠心肌細胞凋亡，其凋亡指數(shù)與模型組比較均存在顯著差異(P<0.05,P<0.01)o與假手術(shù)組比較，模型組心肌組織iNOS的活性增加(P〈0.05),cNOS活性降低(P<0.01)。不同劑量的罠丹通脈片能夠抑制心肌缺血/再灌注大鼠iNOS的活性(P<0.05),增加cNOS活性(P<0.05,P<0.01)。結(jié)^罠丹通脈片能夠抑制缺血/再灌注大鼠心肌細胞凋亡可能與調(diào)節(jié)心肌組織中NOS的活性有關(guān)。【關(guān)鍵詞】罠丹通脈片;缺血/再灌注損傷;心肌;一氧化氮合酶;大鼠缺血性心臟病本質(zhì)的病理改變是缺血心肌細胞因缺氧而壞死或凋亡，盡早恢復(fù)血液

3、灌流是治療缺血性心臟病的首要措施。然而，再灌注損傷成為患者從缺血后復(fù)流獲益的最大障礙。再灌注過程中，內(nèi)源性一氧化氮(NO)所具有的雙重性生物效應(yīng)與NO的來源、釋放的量以及靶組織的狀態(tài)等多種調(diào)控環(huán)節(jié)相關(guān)。心肌中的一氧化氮合酶(nitricoxidesynthase,NOS)是NO的限速酶,其同功酶的活性影響著NO的生物效應(yīng)。罠丹通脈片能夠減少急性心肌梗死面積，促進心臟功能恢復(fù)［1］,并改變?nèi)募『脱逯蠳O的水平［2］。本觀察其對急性缺血/再灌注心肌細胞凋亡和再灌注心肌NOS的影響。1實驗材料1.1動物健康成年SD雄性大鼠30只，體重250?270g,

4、第四軍醫(yī)大學(xué)動物中心提供，合格證號：200505。1.2藥物和主要試劑罠丹通脈片提取浸膏干粉(黃罠30g,丹參30g,當(dāng)歸15g,紅花30g,桂枝10g,2.862g原藥材/g干粉)由中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)科研藥廠提供，以生理鹽水配制成混懸液324g/LoTUNEL試劑盒為Roche公司產(chǎn)品,NOS和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(induciblenitricoxidesynthase,iNOS)測定試劑盒購自南京建成生物工程公司,BCA蛋白定量試劑盒購自Pierce公司。2實驗方法1.1分組及給藥將大鼠隨機分為4組：假手術(shù)組（A組）、缺血/再灌注模型組（

5、B組）、罠丹通脈片+缺血/再灌注I組（C組）、罠丹通脈片+缺血/再灌注II組（D組）°A、B組給予生理鹽水［10mL/（kg?d）］灌胃，C、D組分別給予罠丹通脈片浸膏混懸液1.08g/kg和3.24g/kg灌胃［10mL/（kg?d）］,均連續(xù)灌胃6d0第7日，灌胃完成30min后進行造模。2.2心肌缺血/再灌注大鼠模型的制備參考文獻［3］方法。雄性SD大鼠腹腔注射戊巴比妥鈉30g/L（45mg/kg）麻醉。經(jīng)頸部正中切口，插入氣管套管，行呼氣末正壓通氣（空氣通氣量20mL/kg,頻率48?50次/min）。經(jīng)右頸動脈插入左心導(dǎo)管以測心功能參數(shù)。標(biāo)

6、準(zhǔn)導(dǎo)聯(lián)II記錄心電圖（RM6200多導(dǎo)生理記錄儀，成都儀器設(shè)備廠）o在胸骨左側(cè)約0.5cm處從第4肋縱行切口開胸，剪開心包，暴露心臟，以左冠狀動脈主干為標(biāo)志，在左心耳根部下方2mm處用無創(chuàng)小圓針穿過左冠狀動脈左降支根部下方的心肌表層，穿5-0線,將縫合線穿過小硅膠管后備用；待心電圖恢復(fù)穩(wěn)定，10min后記錄正常參數(shù)。在硅膠管遠端的收緊縫合線至硅膠管，形成弓狀并固定，以阻斷左前降支阻斷血流造成缺血，以心電圖ST段和(或)T波抬高或降低等心肌缺血波形為結(jié)扎成功指標(biāo)，缺血40min,松解并除去硅膠管和多余縫合線，恢復(fù)左冠狀動脈前降支，實現(xiàn)再灌注，逐層縫合胸

7、壁,恢復(fù)自主呼吸。A組動物開胸，冠狀動脈下穿線，但不結(jié)扎。2.3TUNEL法測定心肌細胞凋亡再灌注結(jié)束后迅速剪下心臟，置于冰的PBS中洗凈殘血;分離左心室前壁缺血邊緣區(qū)，于4%多聚甲醛中固定12h,石蠟包埋。檢測前對石蠟切片進行微波修復(fù)，標(biāo)記前用DNA酶處理切片做陽性對照。在染色過程中用PBS代替TdT反應(yīng)液，其余同說明書操作，作為陰性對照。2.4心肌組織中一氧化氮合酶活性的測定實驗完畢，摘除部分結(jié)扎線以下，置于冰的生理鹽水中沖洗，除去血液，濾紙拭干，立即入液氮12h后，轉(zhuǎn)至-70°C存放。分析天平稱取0.1g左心室心肌組織，用生理鹽水制備成10%的

8、組織勻漿，倒入離心管中，3000r/min離心10min,取上清液，用NOS測定試劑盒(化學(xué)比色法)測定大鼠