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《小鼠PGC-1a基因啟動子轉(zhuǎn)錄調(diào)控體系載體的構(gòu)建及活性鑒定》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、小鼠PGC-la基因啟動子轉(zhuǎn)錄調(diào)控體系載體的構(gòu)建及活性鑒定冉莉I,涂晶2,楊靖I,鐘警2,洪濤I,文格波2(1?南華大學(xué)附屬第一醫(yī)院內(nèi)分泌科，湖南衡陽，421001；2.南華大學(xué)附屬第一醫(yī)院臨床研究所，湖南衡陽，421001)摘要：目的：克隆小鼠PGC-la基因的啟動子并分析莫轉(zhuǎn)錄調(diào)控模式。方法：設(shè)計引物，以小鼠肝臟組織DNA為模板，PCR擴增小鼠PGC-la基因啟動了區(qū)并克隆入熒光素嗨報告基因表達載體pGL3-Basic中，構(gòu)建具有PGC-la基因啟動子區(qū)轉(zhuǎn)錄活性的報告質(zhì)粒PGL3-PGC-Ia-Luco在此基礎(chǔ)上，通過設(shè)計特異
2、性引物，引入替換堿皋突變相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控模序，構(gòu)建點突變?nèi)诤陷d體。報告質(zhì)粒與內(nèi)參質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染lclc7及c2cl2細胞系，48h后收獲細胞檢測熒光索酶的表達情況。結(jié)果：構(gòu)建的pGL3-PGC-la-Luc系列報告質(zhì)粒經(jīng)過酶切鑒定及DNA測序分析都顯示止確；轉(zhuǎn)染2種細胞系后進行熒光素陋活性檢測的結(jié)果表明，PGC-la基因啟動子區(qū)域(?2533?+78)具有較強的轉(zhuǎn)錄活性；突變失活PGC-la基因啟動子區(qū)域中的CRE反應(yīng)原件導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄活性明顯降低。結(jié)論：成功構(gòu)建小鼠PGC-la基因啟動子報告質(zhì)粒，證實PGC-la基因上游區(qū)域(?2533?
3、+78)具有較強的啟動子活性；啟動子區(qū)域中的CRE和IRE反應(yīng)原件為主要轉(zhuǎn)錄調(diào)控位點。關(guān)鍵詞：細胞生物學(xué)；PGC-la；啟動了；轉(zhuǎn)錄調(diào)控中圖分類號：Q291CloningandAnalyzingthePromoterofMousePGC-laGeneRANLii,TUJing2,YANGJingi,ZHONGJing2?HONGTaoi,WENGeboz(1.Departmentofendocrinology,TheFirstAffiliatedHospitalofUniversityofSouthChina,Hengyang,H
4、unan,421001;2.Clinicalresearchinstitute,theFirstAffiliatedHospitalofUniversityofSouthChina,Hengyang,Hunan,421001)Abstract:Inthispaper,weclonedmousePGC-1apromotor(-2533?+78)andconstructedthepGL3-PGC-1a-Lucreportervectoranditsmutants.Thetranscriptionactivitywasanalyzedb
5、yLuciferaseassay.PCRwasusedtoobtainDNAfragmentsthatcontainthepromoterofPGC-lagenebyusinggenomeDNApreparedfrommouseliverasthetemplates.ReporterplasmidspGL3-PGC-1a-Lucwhichcontainwild-typeormutant-typepromoterwereconstructcd.AfterthereporterplasmidsweretransicnUytransfe
6、ctedintolclc7andc2cl2cells,theLuciferaseactivityweretested.ResultshowedthatmousePGC-lapromotorfragmentswerecorrectlyamplifiedandthereporterplasmidsweresuccessfullyconstructed；Luciferaseassaysoftheconstructedreporterplasmidsintwocelllinesshowedthatthepromoterregion(?25
7、33-+7S)hadtranscriptionalactivity,theCREandIREsitesweremajortranscriptionalregulatoryregionsinthepromoter.Keywords:cellbiology;PGC-la;promotor;transcriptionalregulation0引言過氧化物酶體增生物激活受體輔激活了??la(PGC-la)是線粒體和關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄輔基金項目：教育部高等學(xué)校博士學(xué)科點專項科研基金(20094324110001)作者簡介：
8、1]?莉(1982-)
9、,女，碩士，主治醫(yī)師，主要研究方向：2型糖尿病發(fā)病機理通信聯(lián)系人：文格波(1957-),男，教授，廨士生導(dǎo)師，主婆研究方向：2型糖尿病的發(fā)病機理.E-mail:gb_wen@yahoo.com.cn激活因了，最早作為調(diào)控脂肪細胞分化的核受體PPAR
