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《食品的測定 實(shí)驗(yàn)八： 食品中維生素C的含量測定》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、實(shí)驗(yàn)九：食品中維生素C的含量測定一、目的要求理解2,4–二硝基苯肼比色法測定抗壞血酸總量的基本原理。學(xué)習(xí)其操作方法和了解影響測定準(zhǔn)確性的因素。二、實(shí)驗(yàn)原理總抗壞血酸包括還原型、脫氫型和二酮古樂糖酸，樣品中還原型抗壞血酸經(jīng)活性炭氧化為脫氫抗壞血酸，再與2,4–二硝基苯肼作用生成紅色脎，其呈色強(qiáng)度與總抗壞血酸含量呈正比，可進(jìn)行比色定量。三、儀器與試劑（一）試劑1、4.5mol/L硫酸：量取250mL濃硫酸小心加入700mL水中，冷卻后用水稀釋至1000mL。2、85%硫酸：小心加900mL濃硫酸于100mL水中。3、2%2,4
2、–二硝基苯肼：溶解2,4–二硝基苯肼2g于100mL4.5mol/L硫酸中，過濾。不用時(shí)存于冰箱內(nèi)，每次使用前必須過濾。4、2%草酸溶液。5、1%草酸溶液。6、1%硫脲溶液：溶解1g硫脲于100mL1%草酸溶液中。7、2%硫脲溶液：溶解2g硫脲于100mL1%草酸溶液中。8、1mol/L鹽酸：取100mL鹽酸，加入水中，并稀釋至1200mL。9、抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取100mg純抗壞血酸溶解于100mL2%草酸溶液中，此溶液每毫升相當(dāng)于1mg抗壞血酸。10、活性炭：將100g活性炭加到750mL1mol/L鹽酸中，回流1h
3、~2h，過濾，用水洗數(shù)次，至濾液中無鐵離子（Fe3+）為止，然后置于110℃烘箱中烘干。（二）儀器1、恒溫箱或電熱恒溫水浴鍋。2、可見光分光光度計(jì)。3、搗碎機(jī)。四、實(shí)驗(yàn)步驟1、樣品處理（全部實(shí)驗(yàn)過程應(yīng)避光）。（1）鮮樣的制備：稱取100g鮮樣即加入100mL2%草酸溶液，倒入搗碎機(jī)中打成勻漿，稱取10.0g~40.0g勻漿（含1mg~2mg抗壞血酸）倒入100mL容量瓶，用1%草酸溶液稀釋至刻度，混勻。過濾，濾液備用。（2）干樣制備：稱取1g~4g干樣（含1mg~2mg抗壞血酸）放入乳缽內(nèi)，加入等量的1%草酸溶液磨成勻漿，
4、連固形物一起倒入100mL容量瓶內(nèi)，用1%草酸溶液稀釋至刻度，混勻。過濾備用。2、樣品還原型抗壞血酸的氧化處理量取25.0mL上述濾液，加入2g活性炭，振搖1min，過濾，棄去最初數(shù)毫升濾液。吸取10.0mL此氧化提取液，加入10.0mL2%硫脲溶液，混勻，此試樣為稀釋液。3、呈色反應(yīng)（1）取3支試管，各加入4mL經(jīng)氧化處理的樣品稀釋液。基中一支試管作為空白，向其余兩試管加入1.0mL2%2,4–二硝基苯肼溶液，將所有試管放入37℃±0.5℃恒溫箱或恒溫水浴中，保溫3h。（2）3h后取出，除空白管外，將所有試管放入冰水中。
5、空白管取出后使其冷到室溫，然后加入2%2,4–二硝基苯肼溶液1.0mL，在室溫中放置10min~15min，后放入冰水內(nèi)。其余步驟同試樣。4、85%硫酸處理當(dāng)試管放入冰水冷卻后，向每一試管（連同空白管）中加入85%硫酸5mL，滴加時(shí)間至少需要1min，需邊加邊搖動(dòng)試管。將試管自冰水中取出，在室溫放置30min后比色。5、樣品比色測定用1cm比色皿，以空白液調(diào)零點(diǎn)，于500nm波長測定吸光值。6、標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制（1）加2g活性炭于50mL標(biāo)準(zhǔn)溶液中，振動(dòng)1min后過濾。吸取10.00mL濾液放入500mL容量瓶中加5.0g硫脲
6、，用1%草酸溶液稀釋至刻度?？箟难釢舛?0μg/mL。吸取5，10，20，25，40，50，60mL稀釋液，分別放放7個(gè)100mL容量瓶中，用1%硫脲溶液稀釋至刻度，使最后稀釋液中抗壞血酸的深度分別為1，2，4，5，8，10，12μg/mL，為抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)使用液。（2）分別吸取4mL各不同深度的抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)使用液，于7個(gè)試管中，吸取4mL水于試劑空白管，各加入1.0mL2%2,4–二硝基苯肼溶液，混勻，將全部試管放入37℃±5℃恒溫箱或恒溫水浴中，保溫3h。3h后將8個(gè)試管取出，全部放入冰水冷卻后，向每一試管中加入5mL
7、85%硫酸，滴加時(shí)間至少需要1min，邊加邊搖，。將試管自冰水取出，在室溫放置30min后，以試劑空白管調(diào)零，并比色測定。以吸光值為縱坐標(biāo)，抗壞血酸含量（mg）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線或計(jì)算回歸方程。五、結(jié)果計(jì)算式中X——樣品中總抗壞血酸含量[mg/100g]；c——由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得或由回歸方程算得試樣測定液總抗壞血酸含量（mg）；m——測定時(shí)所取濾液相當(dāng)于樣品的用量（g）。計(jì)算結(jié)果表示到小數(shù)點(diǎn)后兩位。六、考思考題1、試樣制備過程為何要避光處理？2、為何加入85%硫酸溶液時(shí)，速度要慢而且需在冰水浴條件下完成？解釋若加酸速度過快使
8、樣品管中液體變黑的原因。3、樣品比色測定時(shí)，用樣品空白管調(diào)零的目的何在？
