實驗四細菌地劃線分離與培養(yǎng)

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1、實用文檔實驗四細菌的劃線分離與培養(yǎng)一、實驗前要說明的幾點問題點名,查看學生出勤情況。總結上次作業(yè)，提出作業(yè)中出現的問題并講解。二、板書部分（一）目的要求1.掌握需氧菌分離培養(yǎng)的基本要領。2.了解厭氧菌的分離培養(yǎng)原則及方法。（二）實驗內容1.用普通瓊脂平板做一次劃線分離培養(yǎng)。2.用普通肉湯做一管大腸桿菌的移植培養(yǎng)。3.用普通瓊脂斜面做一管金黃葡萄球菌的移植培養(yǎng)。4.用劃線法進行真菌的分離培養(yǎng)（示教）（三）作業(yè)1.為什么要進行細菌的分離培養(yǎng)？2.進行分離培養(yǎng)應注意哪些事項？3.細菌分離培養(yǎng)的方法有哪些？（重點敘述平板劃線法）4.敘述真菌的劃線分離方法。三、實驗內容主

2、要內容有分離培養(yǎng)及目的、注意事項、分離培養(yǎng)的方法、真菌的培養(yǎng)方法、患病動物病料中分離培養(yǎng)、釣菌、移植。1.什么是分離培養(yǎng)及目的：分離培養(yǎng)是細菌學檢驗的基本技術之一。分離培養(yǎng)之目的，在于從被檢材料中由多種細菌里分離出一種細菌。2.注意事項：1）分離培養(yǎng)前應考慮所分離的細菌的特性，選擇適合其生長需要的培養(yǎng)基（需氧還是厭氧、營養(yǎng)的要求高還是不高、培養(yǎng)溫度等）等。例如：鏈球菌在普通瓊脂不長，要加血清或血液。大腸桿菌和葡萄球菌要求較低，普通的培養(yǎng)基即可生長。文案大全實用文檔2）防止污染。分離培養(yǎng)的整個過程要嚴格無菌操作。培養(yǎng)基和一切用具必須徹底滅菌；操作時必須靠近火焰；操

3、作完畢后，禁止再讓培養(yǎng)基接觸外界空氣。3）防止接種器械過熱，很容易殺死分離培養(yǎng)的細菌，如接種環(huán)在燒灼滅菌后，不能立即釣取細菌材料，應在酒精燈旁涼涼；另外還應注意防止已釣取菌料的接種環(huán)，不慎通過火焰而將細菌殺死。4）初代分離時發(fā)現有多種細菌，觀察找到目的菌落，再拿一肉湯培養(yǎng)基純化培養(yǎng)。然后在接種實驗動物，作成凝集抗原，做血清學鑒定，。還可以反過來做抹片染色觀察。3.分離培養(yǎng)的方法：主要分需氧菌的分離培養(yǎng)方法、厭氧菌的分離培養(yǎng)方法和需要CO菌的培養(yǎng)分離方法。1）需氧菌的分離培養(yǎng)法（1）平板劃線法：劃線后有單個菌落，便于觀察菌落的形態(tài)、溶血性等。方法左手拿瓊脂平板，使

4、其與水平面成45。角；右手拿鉑金耳，使之與水平面平行，靠近酒精燈火焰操作。將接種環(huán)于酒精燈火焰中灼燒滅菌，待其冷卻后，蘸取欲檢材料少許，注意不要劃破瓊脂，不要劃得太疏，以免造成浪費，不要重復劃線，以免形成菌苔。劃線方法：方格劃線、蛇形劃線、區(qū)域劃線、交叉劃線，選擇其中一種進行劃線。劃畢，將接種環(huán)燒灼滅菌，于皿底用蠟筆標記被檢材料名稱及日期，倒轉置恒溫箱中培養(yǎng)。思考題：方格劃線哪個地方會長出單個菌落比較多？（2）傾注法：不常用，這里不做介紹2）厭氧菌的分離培養(yǎng)方法厭氧菌生長繁殖的環(huán)境不能有游離氧的存在。故在培養(yǎng)厭氧菌時，必須創(chuàng)造一個厭氧環(huán)境，一般以降低氧的張力或保

5、持減低的氧張力為原則。目前應用于厭氧菌的分離方法頗多，現就其中較簡便且常用的幾種方法介紹如下：（1）焦性沒食子酸法利用焦性沒食子酸在堿性溶液內能大量地吸收氧的原理進行厭氧培養(yǎng)。通常100cm3文案大全實用文檔空間用焦性沒食子酸1g，10%氫氧化鈉或氫氧化鉀10ml。具體方法有下列有平板培養(yǎng)法、干燥器培養(yǎng)法。平板培養(yǎng)法是將厭氧菌劃線接種于適宜的瓊脂平板，取一小團直徑約2cm的脫脂棉，置于平皿蓋的內面中央，其上滴加10%氫氧化鈉溶液約5ml；在靠近脫脂棉的一側放置焦性沒食子酸約0.5g,注意暫勿使兩者接觸，立即將已接種好的平板覆蓋于平皿蓋上，迅速用融化的石蠟密封平皿

6、邊緣周圍。封畢，輕輕搖動平皿，使被氫氧化鈉溶液浸濕的脫脂棉與焦性沒食子酸接觸，然后置37℃恒溫箱中培養(yǎng)之。干燥器培養(yǎng)法是于干燥器底部放入氫氧化鈉溶液適量，然后再放入2-3個略高于液面的玻璃圓柱（如鏈霉素小瓶），將適量焦性沒食子酸用紙或紗布包好，放置于圓柱上面，使暫勿與氫氧化鈉接觸，然后放下隔板，將已接種的培養(yǎng)皿或試管置于隔板上，待一切準備好后，將蓋蓋好密封，并輕輕搖動干燥器，使焦性沒食子酸落入氫氧化鈉溶液中。（2）高層瓊脂柱搖震培養(yǎng)分離法取長約15cm，直徑約5mm的玻璃棒一支，一端塞以小木塞，另一端塞以棉花塞，高壓滅菌備用；加熱融化一管適合分離厭氧菌用的瓊脂培

7、養(yǎng)基，待冷卻至50℃左右，接入少許經適當稀釋的待分離的培養(yǎng)物或含菌材料，充分搖震均勻；在瓊脂凝固前，迅速以無菌滴管吸取上述已接種的瓊脂培養(yǎng)基，注入上述（1）準備好的玻璃管內，置恒溫箱中培養(yǎng)。（3）連二亞硫酸鈉法將已接種的平板或斜面培養(yǎng)基，置于一玻璃干燥器內（預先測出體積），按每1000ml容積稱取連二亞硫酸鈉（又稱保險粉）和無水碳酸鈉各4g，并分別研細均勻，臨用前混合置于一平皿內，放在培養(yǎng)基上層，然后將蓋蓋嚴，用凡士林密封，置37℃恒溫箱中培養(yǎng)。2）二氧化碳培養(yǎng)法少數細菌如布氏桿菌（牛型），在含有10%二氧化碳的環(huán)境下生長良好。要創(chuàng)造這樣的環(huán)境，常用的方法為燭缸

8、法。將接種的培養(yǎng)基置玻璃