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《033111113036雙向凝膠電泳技術原理與應用》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在工程資料-天天文庫。
1、雙向凝膠電泳技術原理與應用Principleandapplicationoftwodimensionalgelelectrophoresis姓名：xx班級：檢驗本科1113班學號:XXX【摘要】人類基因組計劃與美國塞萊拉遺傳信息公司于2001年在美國《科學》雜志和英國《自然》雜志聯合宣布，他們繪制出了準確、清晰、完整的人類基因組圖譜，至此，人類基因組計劃已基本完成，隨著后基因組時代的到來，蛋白質組學得到了空前的發(fā)展，蛋白質組研究旨在揭示基因表達的真正執(zhí)行生命活動的全部蛋H質的表達規(guī)律和生物功能。包括蛋白質組、蛋白質
2、組學、功能蛋白質組學和結構基因組學等新的概念的提出，蛋白質組學已成為當今生物領域屮極其活躍的學科。其中雙向電泳(two-dimensionalelectrophoresis,2.DE)是蛋白質組研究的三大關鍵核心技術Z—[abstract】IlumangenegroupplansandUnitedStatessailailagencticinformationcompanyYu2001inUnitedStatesScieneeundermagazineandUnitedKingdomnaturalundermaga
3、zinejointannounced,theydrawsouthasaccurate,andclear,andcompleteofhumangeneGroupmap,atthispoint,humangenegroupplanshasbasiccompleted,asHougenegrouperaofcomes,proteingrouplcarngethasunprecedentedofdcvclopmcnt,proteingroupresearchaimedatrevealsgeneexpressofrealim
4、plementationlifeactivitiesofallproteinofexpresslawandbiologicalfunction.Ineludesproteome,proteomics,structuralproteomicsandfunctionalgenomicsofnewconcepts,suchasproposed,proteomicshasbecomeextremelyactiveinthefieldofbiologicalsciences.Two-dimensionalgelelectro
5、phorcsis(two-dimensiormlelectrophoresis,2.DE)isoneofthethreekeycoretechnologiesofproteomeresearch【keywords】two-dimensiormlelectrophoresis,2.DEproteomicsPost-genomicsera【前言】由于蛋白質的等電點和分子量是兩個彼此不相關的重要性質，而2.DE同時利用了蛋口質間的這兩個性質上的差異分離蛋口質，因此2.DE的分離能力非常強大，它甚至能將細胞中的5000種蛋
6、白分離開，2.DE在分離蛋口混合樣品、比較差異方面有不可替代的作用，結合質譜鑒定技術可查明人型蛋片復合物各組組分，與其他生物技術如分了生物學、分了遺傳工程、免疫學、微量蛋白質的口動氨基酸序列分析相結合，可以快速準確地發(fā)現和鑒定新的蛋白質?！緹晒舛縋CR的基本原理】"切雙向電泳由于具有高分辨率和高靈敏度已成為分析復雜蛋白混合物的基木工具⑴o口1975年O'Farrel等⑵建立這種技術后，已有許多改進，使得這一技術F1趨完善。2-DE是利用蛋白質的帶點性和分子量大小的差異，通過兩次凝膠電泳達到分離蛋白質的技術。第一向
7、電泳是依據蛋白質的等電點不同，通過等電聚焦電泳(isoelec-tricfocusing,IEF)將不同凈電荷的蛋Cl質在PH梯度介質屮外加電場作用形成分離的蛋白質區(qū)帶。然后將凝膠包埋在SDS-PAGE凝膠板上端，根據蛋白質分了量的不同，在垂直或水平方向進行十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE),即第二向電泳;在IEF中，蛋白質兇等電點不同而被分離;在SDS.PAGE屮，不同分子量的蛋白質相互間被分離開，再用考馬斯亮蘭或銀染進行檢測⑶，經Pdquest等軟件對結果進行比對、解析。【雙向電泳技術應用過
8、程中的關鍵步驟】1、樣品制備(蛋白提取)(1)細胞培養(yǎng)、處理和收集；(2)將細胞在IEF裂解緩沖液中溶解；蛋口質的溶解常采用含有8mol/L尿素、4%[3-(3-膽胺內基)-丙磺酸](SHAPS)、50~100mmol/LDTT和40mmol/LTris的樣品緩沖液。樣品溶解得不好會減少分離到的蛋口質數量，同時會造成等電聚焦時某些蛋口質的沉淀，從而減少傳移到
