白血病融合基因

《白血病融合基因》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。

1、bcr/abl融合基因慢性粒細(xì)胞白血?。–hronicMyelogenousLeukemia,CML）是一種發(fā)生于造血干細(xì)胞的血液系統(tǒng)惡性克隆增生性疾病。在受累的細(xì)胞系中可找到Ph標(biāo)記染色體或（和）bcr/abl基因重排?；蚪Y(jié)構(gòu)人abl基因位于9號染色體長臂，有1b、1a和2-11共12個外顯子。轉(zhuǎn)錄始自1b或1a，形成的兩種mRNA長度分別為7kb和6kb，合成的兩種蛋白質(zhì)分子量均約為145，前者定位于細(xì)胞膜，而后者主要在細(xì)胞核內(nèi)。abl主要結(jié)構(gòu)有N端的肉瘤同源2(srchomology,SH2）、SH1。SH2結(jié)合磷酸化的酪氨酸殘基，SH1具有酪氨酸激酶活性。近C端富含酸性氨基酸殘基，可

2、結(jié)合DNA。abl蛋白參與細(xì)胞周期調(diào)節(jié)。在G0期，abl-Rb蛋白復(fù)合物與DNA結(jié)合。在G1→S轉(zhuǎn)變過程中，Rb被磷酸化，abl與之分離，并激活，使RNA聚合酶磷酸化，促進(jìn)轉(zhuǎn)錄，細(xì)胞進(jìn)入S期。bcr基因位于22號染色體長臂，有23個外顯子。蛋白產(chǎn)物分子量均為160。bcr蛋白第1-63個氨基酸是二聚體化結(jié)構(gòu)，參與bcr蛋白多聚體的形成。bcr蛋白參與細(xì)胞周期調(diào)節(jié)，但詳細(xì)過程還不十分明確。bcr基因斷裂點(diǎn)集中在三個區(qū)域：主要(majorbcr,M-bcr）、次要（minorbcr,m-bcr）和μ（μ-bcr）區(qū)域。abl基因斷裂位于第1或第2內(nèi)含子。因斷裂點(diǎn)不一，bcr/abl融合基因及其mR

3、NA和蛋白產(chǎn)物呈多樣性。CML的bcr基因斷裂點(diǎn)常位于M-bcr，主要是b2a2和b3a2，蛋白分子量為210kb。bcr基因在ALL中大約2/3為m-BCR位點(diǎn)。Ph1染色體和bcr/abl融合基因是CML的分子基礎(chǔ)，并可作為區(qū)分典型CML和非典型CML的診斷指標(biāo)。由于t(9；22)(q34；q11.2)而產(chǎn)生的費(fèi)城染色體（Ph）在血液腫瘤中具有重要的診斷和預(yù)后意義，出現(xiàn)于90%以上的CML、30%的成人ALL、2%-10%的兒童ALL、以及少數(shù)的AML和MM患者。位于9q34的ABL基因與位于22q11的BCR基因相互易位，形成bcr/abl融合基因。此基因產(chǎn)生一種新的mRNA，編碼的蛋白

4、為P210。P210具有增強(qiáng)酪氨酸激酶的活性，改變了細(xì)胞多種蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸化水平和細(xì)胞微絲機(jī)動蛋白的功能，從而擾亂了細(xì)胞內(nèi)正常的信號傳導(dǎo)途徑，使細(xì)胞失去了對周圍環(huán)境的反應(yīng)性，并抑制了凋亡的發(fā)生。具有BCR/ABL融合基因的患者預(yù)后差?；驒z測3.1SouthernBlot即DNA印跡，可以對bcr-abl融合基因DNA重排進(jìn)行分子生物學(xué)檢測。將經(jīng)限制性內(nèi)切酶酶切及瓊脂糖電泳分離的DNA片段轉(zhuǎn)移到固相雜交膜上，胚系DNA會產(chǎn)生特征性片段，但發(fā)生過基因重排的細(xì)胞DNA因酶切位點(diǎn)有所改變會產(chǎn)生有別于胚系的DNA酶切片段。大多數(shù)bcr基因的斷裂點(diǎn)集中于5.8kb的主要斷裂點(diǎn)集簇區(qū)（M-bcr）。從白

5、血病患者白細(xì)胞中抽提的基因組DNA，經(jīng)一組限制性內(nèi)切酶消化及瓊脂糖凝膠電泳分離后轉(zhuǎn)移到尼龍膜上，用取自M-bcr3’和5’端的bcr探針與之雜交。放射自顯影洗片后即可顯示所要檢測的條帶，對于CML患者，除可見到一條與胚系bcr基因組DNA相對應(yīng)的條帶外，其他的條帶說明存在重排的bcr等位基因。3.2RT-PCR采用異硫氫酸胍酚、氯仿一步法提取細(xì)胞總RNA，方法見參考文獻(xiàn)，用RT-PCR技術(shù)擴(kuò)增bcr-abl基因接合區(qū)mRNA是檢測CML敏感而特異的方法，設(shè)計兩對引物，先進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)合成cDNA，再進(jìn)行PCR擴(kuò)增，取擴(kuò)增后產(chǎn)物10μl，用2%的瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳，在紫外燈下觀察結(jié)果。3.3實(shí)時

6、定量PCR利用已知起始拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)品可作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，其中縱坐標(biāo)為起始拷貝數(shù)的對數(shù)，橫坐標(biāo)代表Ct值，然后根據(jù)待測樣本的Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計算出該樣本的起始拷貝數(shù)。另外bcr/abl融合基因編碼的蛋白P210可以用Western印跡或酶聯(lián)免疫反應(yīng)加以檢測。PML/RARα融合基因急性早幼粒細(xì)胞白血?。ˋPL）是急性髓細(xì)胞白血病（AML）的一種特殊類型（M3），占所有AML病例的10%-15%。APL具有獨(dú)特的臨床表型及細(xì)胞形態(tài)學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)和分子生物學(xué)特征。目前發(fā)現(xiàn)約95%的APL患者伴有異常染色體核型t(15;17)(q22;q21)，該易位使15號染色體上的PML基因與17號染色體上的RAR

7、α基因發(fā)生相互易位形成PML/RARα融合基因，是APL的一個特異分子標(biāo)志。PML/RARα融合蛋白通過顯性負(fù)抑制作用抑制早幼粒細(xì)胞分化成熟，從而阻斷細(xì)胞分化導(dǎo)致持續(xù)增殖。全反式維甲酸（ATRA）和三氧化二砷能靶向降解PML/RARα融合蛋白，恢復(fù)野生型PML和RARα基因功能，解除其對基因轉(zhuǎn)錄的抑制，誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生分化和凋亡，使APL得到有效治療。ATRA與化療聯(lián)合使用可使APL的完全緩解率達(dá)90