雙縮脲反應

《雙縮脲反應》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。

1、雙縮脲反應biuretreaction蛋白質(zhì)在堿性溶液中與硫酸銅作用形成紫色絡合物的呈色反應。在540nm波長處有最大吸收?？捎糜诘鞍踪|(zhì)的定性和定量檢測?！　??紫色絡合物分子結(jié)構(gòu)式在堿性溶液（NaOH）中，雙縮脲（H2NOC－NH－CONH2）能與銅離子（Cu2+）作用，形成紫色絡合物（該物質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)式見圖），該反應即雙縮脲反應。　　雙縮脲反應是肽和蛋白質(zhì)所特有的，而為氨基酸所沒有的一種顏色反應。一般分子中含有兩個氨基甲酪基（即肽鍵：-CO-NH-）的化合物與堿性銅溶液作用，就會形成紫色或藍紫色絡合物?！　∽ⅲ撼?CO-NH-有此反應外，（-CONH2-）、（-CH2-）

2、、（-NH2-）、（-CS-CS-NH2）等基團亦有此反應。雙縮脲反應的鑒定　　由于蛋白質(zhì)分子中含有很多與雙縮脲結(jié)構(gòu)相似的肽鍵，因此也能與銅離子在堿性溶液中發(fā)生雙縮脲反應，且顏色深淺與蛋白質(zhì)的含量的關(guān)系在一定范圍內(nèi)符合比爾定律，而與蛋白質(zhì)的氨基酸組成及分子量無關(guān)，故可用雙縮脲法測定蛋白質(zhì)的含量（借助分光光度計可減小誤差）?！　‰p縮脲反應主要涉及肽鍵，因此受蛋白質(zhì)特異性影響較小。使用試劑價廉易得，操作簡便，可測定的范圍為1～10mg蛋白質(zhì)，適于精度要求不太高的蛋白質(zhì)含量的測定，能測出的蛋白質(zhì)含量須在約0.5mg以上。雙縮脲法的缺點是精確度低、所需樣品量大。干擾此測定的物質(zhì)包括在

3、性質(zhì)上是氨基酸或肽的緩沖液，如Tris緩沖液，因為它們產(chǎn)生陽性呈色反應，銅離子也容易被還原，有時出現(xiàn)紅色沉淀。配制雙縮脲試劑的注意事項　　雙縮脲試劑由NaOH溶液（0.1g/mL）和CuSO4溶液（0.01g/mL）配制而成，配制比例為5:1。但是雙縮脲試劑不用現(xiàn)配現(xiàn)用，這是與斐林試劑不同的地方之一！BiurettestThecharacteristiccolorofapositivebiurettestThebiurettestisachemicaltestusedfordetectingthepresenceofpeptidebonds.Inthepresenceofpe

4、ptides,acopper(II)ionformsaviolet-coloredcomplexinanalkalinesolution.[1]Severalvariantsonthetesthavebeendeveloped.TheBiuretreactioncanbeusedtoassaytheconcentrationofproteinsbecausepeptidebondsoccurwiththesamefrequencyperaminoacidinthepeptide.Theintensityofthecolor,andhencetheabsorptionat540

5、?nm,isdirectlyproportionaltotheproteinconcentration,accordingtotheBeer-Lambertlaw.Inspiteofitsname,thereagentdoesnotinfactcontainbiuret((H2N-CO-)2NH).Thetestissonamedbecauseitalsogivesapositivereactiontothepeptidebondsinthebiuretmolecule.[edit]ProcedureAnaqueoussampleistreatedwithanequalvol

6、umeof1%strongbase(sodiumorpotassiumhydroxidemostoften)followedbyafewdropsofaqueouscopper(II)sulfate.Ifthesolutionturnspurple,proteinispresent.5–160?mg/mlcanbedetermined.[edit]BiuretreagentThebiuretreagentismadeofpotassiumhydroxide(KOH)andhydratedcopper(II)sulfate,togetherwithpotassiumsodium

7、tartrate.Thereagentturnsfrombluetovioletinthepresenceofproteins,bluetopinkwhencombinedwithshort-chainpolypeptides.[2]Notallbiurettestsrequirethebiuretreagent.Thereagentiscommonlyusedinabiuretproteinassay,acolorimetricassayusedtodetermineproteinconcentrat