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《鎘脅迫對香魚肝蛋白質組學的影響【開題報告+文獻綜述+優(yōu)秀畢業(yè)設計】》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、本科畢業(yè)論文系列開題報告水產養(yǎng)殖鎘脅迫對香魚肝蛋白質組的影響一、選題的背景與意義香魚（Plecoglossusaltivelis）系鮭形目、香魚科、香魚屬，一年生洄游性魚類，俗稱油香魚，為我國重要的小型名貴經(jīng)濟魚類，隨著工業(yè)的快速發(fā)展，我國多個水域環(huán)境重金屬鎘污染日益嚴重，香魚作為浙江省重要經(jīng)濟魚類產量受到嚴重影響?，F(xiàn)有的生物監(jiān)測技術側重于研究各類生物有機體對重金屬的富集量和表達單一蛋白質指示物的規(guī)律，而蛋白質雙向凝膠電泳有助于更為全面的分析鎘脅迫對香魚肝組織蛋白質組學的影響（黃清育等,2008）。在區(qū)分野生鱘魚、養(yǎng)殖鱘魚以及
2、腌制鱘魚（MartinezIetal.2007），急性鎘脅迫牙鲆鰓組織蛋白的變化及腦組織運鐵蛋白含量的變化(ZhuJYetal,2006;LingXP,2009)，中華絨螯蟹急慢性鎘脅迫下前鰓蛋白質變化(SilvestreFetal.2006)，鎘脅迫下大黃魚肝組織中運鐵蛋白和鐵調素基因表達的變化(ChenJ,2008)，以及不同鹽度脅迫下香魚載脂蛋白含量的變化(ChenJ,2009)等方面進行過基于雙向電泳技術的蛋白質組學研究。加之原子吸收光譜法由于具有靈敏度高，應用成熟以及相對便宜等優(yōu)點，是目前測定重金屬含量最主要的方法，
3、在重金屬元素分析中得到了廣泛的應用。因此，本課題擬將通過雙向凝膠電泳實驗從蛋白質組的角度了解鎘脅迫對肝組織蛋白質的影響，優(yōu)化分離受氯化鎘污染前后香魚肝蛋白質組，構建差異蛋白質組的電泳圖譜，其技術可為今后連續(xù)監(jiān)測流動水體中各類重金屬污染程度及危害性提供可行性分析技術。二、研究的基本內容與擬解決的主要問題：研究基本內容：1.一定濃度鎘脅迫下香魚肝組織蛋白質表達量的變化2.找出并分析香魚在鎘脅迫下肝組織中差異明顯的蛋白質點3.對差異表達蛋白斑點進行質譜分析，并進一步生物信息學分析4.初步探討魚體肝組織蛋白在應對鎘脅迫時的解毒生理機理
4、。擬解決的主要問題：構建香魚肝組織蛋白質雙向凝膠電泳的條件，為環(huán)境監(jiān)測提供理論依據(jù)，以及為魚類安全食用提供參考價值。三、研究的方法與技術路線：（一）研究方法1鎘脅迫樣品處理：鎘脅迫濃度設置梯度為5mg/l，試驗時間為24h。購買市售香魚于實驗室中暫養(yǎng)7天以上，以適應實驗室馴養(yǎng)環(huán)境。分組實驗，設對照組和實驗組，設平行組，每組14尾。實驗用水用塑料箱蓄自來水70L，并使用空氣壓縮機連續(xù)暴氣三天。實驗條件為自然光照，水溫20℃±1℃，pH7.73左右。24h后取解剖香魚取出肝臟，立刻投入液氮中暫存，后期分類整理好放入-70℃冰箱中保
5、存。2肝組織蛋白雙向電泳：參考吳海慶（2009）方法進行香魚肝組織蛋白質的雙向電泳實驗。液氮碾磨法提取蛋白，分別進行第一向IEF等電聚焦實驗和第二向SDS-PAGE電泳，用考馬斯亮藍染色液對SDS-PAGE膠進行染色，并對脫色后的凝膠進行掃描并采集圖像，利用PDquest分析軟件分析實驗組和對照組膠，并篩選出差異大的蛋白點。3差異蛋白的鑒定及分析：將差異蛋白質點的進行篩選并切膠送往質譜公司進行串聯(lián)質譜(LC-MS-MS)分析或肽指紋圖譜(MALDI-TOF-MS)分析，通過蛋白質數(shù)據(jù)庫搜索鑒定差異表達蛋白斑點并進行生物信息學分
6、析，初步探討魚體肝組織蛋白在應對鎘脅迫時的解毒生理機理。（二）技術路線：購得健康香魚，暫養(yǎng)，鎘脅迫實驗收集實驗組、對照組香魚組織撰寫論文提取肝組織蛋白質雙向凝膠電泳選取差異蛋白質譜分析鑒定蛋白數(shù)據(jù)處理與分析論文答辯查找資料，寫開題報告和綜述綜述儀器、藥品的購買和各種實驗材料的準備四、研究的總體安排與進度：2010.2-2010.3畢業(yè)論文選題。2010.3-2010.10進行文獻查閱和資料收集，制定具體研究計劃和試驗方案。2010.4-2010.6親體的購買、暫養(yǎng)、鎘脅迫處理。2010.6-2010.7將兩組香魚肝臟進行雙向電
7、泳分析，取差異表達蛋白斑點進行質譜分析。2010.7-2010.10數(shù)據(jù)和材料整理、分析，查閱相關蛋白的文獻2011.2-2011.3完成2篇外文翻譯，2011.2-2011.4論文撰寫、提交并答辯。2010.5.9開題答辯。五、主要參考文獻：[1]PenningtonSR,WilkinsMR,HochstrasseDF,etal.Proteomeanalysis:fromproteincharacterizationtobiologicalfunction[J].TrendsinCellBiology,1997,7(4):1
8、68-173.[2]曾嶸,夏其昌.蛋白質組學研究進展與趨勢[J].中國科學院院刊,2002,(3):166-169.[3]ShepardJL,BradleyBP.ProteinexpressionsignaturesandlysosomalstabilityinMytilus
