熱休克蛋白70在宮頸癌組織中的表達(dá)及意義

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1、熱休克蛋白70在宮頸癌組織中的表達(dá)及意義熱休克蛋白（heatshockprotein,HSP）是一組進(jìn)化上高度保守的蛋白質(zhì),機(jī)體細(xì)胞在熱休克或受到其他外來(lái)刺激時(shí)誘導(dǎo)HSP產(chǎn)牛，其在許多腫瘤中呈高表達(dá)［1-2］。本研究采用免疫組化SP法檢測(cè)宮頸癌組織中HSP70的表達(dá)，從而探討其與宮頸癌的關(guān)系。1對(duì)象與方法1.1研究對(duì)象選擇2008年1月?2009年1月我院收治的47例宮頸癌患者，均接受手術(shù)治療，留取手術(shù)切除標(biāo)木。術(shù)前均未進(jìn)行放、化療。同時(shí)收集10例正常宮頸組織作為對(duì)照組。1.2試劑兔抗人HSP70多克隆抗體、SP免疫組化試劑盒及

2、DAB顯色劑均購(gòu)口北京中杉牛物技術(shù)有限公司。1.3免疫組化SP法切片經(jīng)脫蠟、梯度酒精脫水后，自來(lái)水沖洗，蒸懈水沖洗3mine3%甲醇-H2O2中室溫孵育20min,蒸懾水沖洗沖洗3min,PBS沖洗5minx2次。HSP70釆用高壓熱修復(fù)。室溫冷卻,放入PBS內(nèi)沖洗5minx2次，用山羊血?清封閉，37°C溫箱內(nèi)孵育45min。滴加兔抗人HSP70抗體（一抗）按1:100稀釋?zhuān)瑢?duì)照組用PBS,4°C過(guò)夜。PBS沖洗5minx3次，滴加二抗工作液，37°C溫箱內(nèi)孵育30min,PBS沖洗5minx3次。滴加三抗工作液,37°C溫箱

3、內(nèi)孵育30min,PBS沖洗5minx3次，DABM色。蘇木素復(fù)染，常規(guī)梯度酒精脫水，中性樹(shù)膠封片，顯微鏡下觀(guān)察。以已知陽(yáng)性切片作陽(yáng)性對(duì)照，PBS代替一抗作陰性對(duì)照。1.4結(jié)果判定陽(yáng)性染色為胞質(zhì)和（或）胞核中出現(xiàn)棕黃色顆粒。每張切片至少觀(guān)察10個(gè)高倍視野，計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞的百分比：<5%為（-）,5%?25%為（+）,26%?50%為（++）,>50%為（+++）,（+）?（+++）為陽(yáng)性。1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法數(shù)據(jù)用SPSS10.0軟件進(jìn)行分析，經(jīng)確切概率法檢驗(yàn)，PV0.05農(nóng)示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果2.1HSP70的表達(dá)4

4、7例宮頸癌中HSP70陽(yáng)性表達(dá)率為74.5%（35/47）,10例正常宮頸組織中HSP70陽(yáng)性表達(dá)率為20.0%（2/10）,經(jīng)確切概率法檢驗(yàn)，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（PV0.01）o2.2HSP70與組織分級(jí)的關(guān)系47例宮頸癌包括高分化10例，中分化21例，低分化16例，其陽(yáng)性率見(jiàn)農(nóng)1。結(jié)果顯示，宮頸癌分化程度越低，HSP70的表達(dá)越強(qiáng)。表1宮頸癌HSP70陽(yáng)性率與紐織分級(jí)的關(guān)系［n（%）J2.1HSP70與宮頸癌組織學(xué)類(lèi)型的關(guān)系宮頸癌組織分型及HSP70陽(yáng)性率見(jiàn)表2。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)o表2宮頸癌H

5、SP70陽(yáng)性率與組織學(xué)類(lèi)型的關(guān)系[n(%)]3討論HSP廣泛存在于原核和真核生物，在生理?xiàng)l件下，HSP呈基礎(chǔ)表達(dá)，調(diào)控細(xì)胞的增殖與分化、胚胎的生長(zhǎng)發(fā)冇、激素的功能效應(yīng)等。HSP能調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)的折疊、傳遞與降解，在維持組織細(xì)胞的口身穩(wěn)定和環(huán)境適應(yīng)性方ifii也有重要作用。在有害因索如熱、冷、缺血、低氧、有機(jī)毒物、重金屬、微生物、組織創(chuàng)傷、棊因損傷等的刺激下，均可誘導(dǎo)HSP產(chǎn)生，并保護(hù)細(xì)胞對(duì)抗熱休克和其他導(dǎo)致人量蛋白質(zhì)損傷、變性的有害刺激，防止應(yīng)激所致的蛋白質(zhì)損傷，進(jìn)而啟動(dòng)內(nèi)源性保護(hù)機(jī)制，發(fā)揮抗損傷的應(yīng)激保護(hù)效應(yīng)。大量研究顯示，表達(dá)H

6、SP的腫瘤細(xì)胞對(duì)熱休克、射線(xiàn)(如丫射線(xiàn))、TNF-a等多種刺激誘導(dǎo)的凋亡有抑制作用。腫瘤細(xì)胞HSP70表達(dá)水平--般較高，趙霞等[3]用HSP70反義寡聚核甘酸阻斷Molt-4等腫瘤細(xì)胞的內(nèi)源性HSP70表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，HSP70反義寡聚核甘酸的使用可以誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，同吋抑制腫瘤細(xì)胞增殖，提示HSP70的表達(dá)有助于腫瘤細(xì)胞的生存和增殖。本研究發(fā)現(xiàn)，宮頸癌組織HSP70的陽(yáng)性表達(dá)率為74.5%,正常宮頸組織HSP70的陽(yáng)性表達(dá)率為20.0%,與郭云鴻等[4]的報(bào)道一致。水研究結(jié)果顯示，HSP70的表達(dá)與宮頸癌細(xì)胞的分化程度和組

7、織類(lèi)型沒(méi)有明顯的相關(guān)性，但可以看出，高、中、低分化各白的陽(yáng)性率差別很大，細(xì)胞分化程度越低，HSP70的表達(dá)越強(qiáng)，推測(cè)HSP70的表達(dá)可能與患者的預(yù)后有關(guān)，HSP70表達(dá)越強(qiáng)，患者預(yù)后越差。由此可以推斷，HSP70的表達(dá)可能與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后有關(guān)，檢測(cè)其表達(dá)水平有望作為估計(jì)患者預(yù)后的指標(biāo)之一。[參考文獻(xiàn)][1]JonesEL,ZhaoMJ,StevensonMA,etal.The70kilodaltonheatshockproteinisaninhibitorofapoptosisinprostatecancer[J].I

8、ntJHyperthermia,2004,20(8):835-849.[2]WangXP,QiuFR,LiuGZ,etal.Correlationbetweenclinicopathologyandexpressionofheatshockprotein70an