熒光定量PCR試劑盒說明書.pdf

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1、CatalogNo.RT0411-01產(chǎn)品簡介2×SYBRGreenMix（WithROX）是使用染料法（SYBRGreenⅠ）進(jìn)行實時熒光定量PCR擴(kuò)增反應(yīng)的預(yù)混體系，包括HotstartTaqDNAPolymerase，Buffer，dNTPs，SYBRGreen2+I熒光染料、Mg和ROX校正染料。本品含有經(jīng)化學(xué)修飾的全新高效的熱啟動酶HotstartTaqDNAPolymerase，在常溫下沒有聚合酶活性，有效避免在常溫條件下由引物和模板非特異性結(jié)合或引物二聚體而產(chǎn)生的非特異性擴(kuò)增，酶的激活須在95℃下孵育10分鐘。主要用于基因組

2、DNA靶序列和RNA反轉(zhuǎn)錄后cDNA靶序列的檢測。本品所含的熒光染料SYBRGreenI可以與所有的雙鏈DNA結(jié)合，使該產(chǎn)品可用于不同靶序列的檢測而不需合成特異性標(biāo)記探針。所含的ROX染料可校正定量PCR儀孔與孔之間產(chǎn)生的熒光信號誤差,適用于以ROX作為校正染料的所有熒光定量PCR儀。產(chǎn)品包裝2×SYBRGreenCat.No.KitSizeRNase-FreeWaterMix（WithROX）RT0411-0150T（50μl體系）1.25mL1.25mLRT0411-02100T（50μl體系）2.5mL2.5mLRT0411-032

3、00T（50μl體系）5.0mL5.0mLRT0411-0020T（50μl體系）0.5mL0.5mL保存條件-20℃避光保存，盡量避免盡量避免反復(fù)凍融。注意事項1使用前請上下顛倒輕輕混勻，盡量避免起泡，并經(jīng)短暫離心后使用。2本產(chǎn)品中含有SYBRGreenI熒光染料和ROX染料，保存本產(chǎn)品或配制PCR反應(yīng)液時應(yīng)避免強(qiáng)光照射。3避免反復(fù)凍融本品，反復(fù)凍融可能使產(chǎn)品性能下降。如果在短期內(nèi)需要頻繁使用，可在2-8℃保存。使用方法以下舉例為常規(guī)PCR反應(yīng)體系和反應(yīng)條件，實際操作中應(yīng)根據(jù)模板、引物結(jié)構(gòu)和目的片段大小不同進(jìn)行相應(yīng)的改進(jìn)和優(yōu)化。1.PC

4、R反應(yīng)體系：試劑50μl反應(yīng)體系終濃度2×SYBRMixture（WithROX）25μl1×ForwardPrimer，10μM1μl0.2μM(推薦)ReversePrimer，10μM1μl0.2μM(推薦)TemplateDNA2μlRNase-FreeWaterupto50μl注：引物濃度以0.1-1.0μM終濃度作為設(shè)定范圍的參考。擴(kuò)增效率不高時，提高引物的濃度；發(fā)生非特異性反應(yīng)時，可降低引物濃度;DNA模板的量以10-100ng基因組DNA或1-10ngcDNA為參照。2.PCR反應(yīng)程序：兩步法PCR：步驟溫度時間預(yù)變性95

5、℃10min變性95℃15s35-40個循環(huán)退火/延伸60℃1min融解曲線分析95℃15s60℃1min95℃15s60℃15s注意：1）本產(chǎn)品所采用的熱啟動酶須在預(yù)變性95℃、10min條件下實現(xiàn)酶的活化。2）建議采用兩步法PCR反應(yīng)程序，若因使用Tm值較低的引物等原因，得不到良好的實驗結(jié)果時，可嘗試進(jìn)行三步法PCR擴(kuò)增，退火溫度請以56℃-64℃的范圍作為設(shè)定參考。3）融解曲線分析請以所使用的熒光定量PCR儀推薦的程序進(jìn)行設(shè)定，本說明是以ABI7500熒光定量PCR儀為參照設(shè)定。