LB平板配置.doc

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1、LB平板制備：Amp終濃度為100μg/ml（1）配制LB液體培養(yǎng)基（無Amp）按25g/l稱取6.25gLBpowder，加入250ml錐形瓶中，再加入250mlddH2O，用雙層鋁箔封口121℃，20min，滅菌。（2）配制LB固體培養(yǎng)基（含有Amp）1）按15g/l稱取3.75gAgar加入已有6.25gLBpowder的250ml錐形瓶中，加入250mlddH2O，雙層鋁箔封口。121℃，20min，高溫高壓滅菌。2）帶培養(yǎng)基冷卻至55℃左右時，按1：1000加入250μlAmpstock（10

2、0mg/ml）使終濃度為100μg/ml，即工作濃度。搖勻，同時避免產(chǎn)生氣泡。3）趁熱倒平板，每個表面皿約25ml左右，冷卻成形后，倒置，用保鮮膜，5個一組封裝，防止變干，于4℃保存。（3）分裝1）將LB液體培養(yǎng)基1ml/EP管分裝，于-20℃保存2）將滅菌水1ml/EP管分裝，于-20℃保存3）將Ampstock按1ml/EP管分裝，用封口膜封口，-20℃保存（4）80%甘油滅菌分裝1）按1：4將滅菌水與甘油充分混合，得80%甘油2）每EP管分裝250μl，121℃，20min高溫高壓滅菌，-20℃保

3、存50*TAEbuffer：242gTris，57.1ml冰醋酸100ml，0.5mol/lEDTA（PH8.0），定容至1LTBEbuffer：Tris,Boricacid,EDTA.16.87gTBEPowder溶于1LddH2O10*PBS:NaCl80g,KCl2g,Na2HPO46.1g,KH2PO41.9g加ddH2O定容至1L,調(diào)PH為7.350*TEBuffer:500μl1MTris-HCl和100μl0.5MEDTA于50mlddH2O中DEPC水：按0.1%比例將1mlDEPC加入

4、1LddH2O中，搖勻，37℃溫育至少12h。121℃，20min，滅菌以除去DEPC.Ampstock:100mg/mlAmpworkconcentration:100ug/mlKanastock:?mg/mlKanaworkconcentration:10ug/ml