酵母菌的培養(yǎng)與分離.doc

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1、...微生物學(xué)大實驗實驗指導(dǎo)編者：生物技術(shù)教研室2007.3.............目錄實驗一酵母菌的培養(yǎng)與分離‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥2實驗二酵母菌的鑒定‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥7實驗三酵母菌耐受能力的測定‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥19實驗四酵母菌發(fā)酵工藝條件的優(yōu)化‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥22實驗五耐高溫酵母菌株的誘變選育‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥24實驗六釀酒酵母細(xì)胞固定化與酒精發(fā)酵‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥27.............耐高溫酒精酵母菌的選育及發(fā)酵條件的研究實驗一酵母菌的培養(yǎng)與分離一、實驗?zāi)康膶W(xué)習(xí)培養(yǎng)和分離酵

2、母菌的技術(shù)和方法二、基本原理大多數(shù)酵母菌為腐生，其生活最適pH為4.5－6，常見于含糖分較高的環(huán)境中，例如果園土、菜地土及果皮等植物表面。酵母菌生長迅速，易于分離培養(yǎng)，在液體培養(yǎng)基中，酵母菌比霉菌生長得快。利用酵母菌喜歡酸性環(huán)境的特點，常用酸性液體培養(yǎng)基獲得酵母菌的培養(yǎng)液（這樣做的好處是酸性培養(yǎng)條件則可抑制細(xì)菌的生長），然后在固體培養(yǎng)基上用劃線法分離之。三、實驗主要內(nèi)容和要求（一）本次實驗的方案由同學(xué)們自己制定，實驗包括：1．馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基,乳酸馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)液的配制。2.菌株的篩選,根據(jù)一定的生產(chǎn)目的并從特定的樣品篩選出高產(chǎn)酒精的適宜的酵母菌株。3.酵母菌的分離,

3、要求接種一次,28-30℃，培養(yǎng)24小時，轉(zhuǎn)接一次，28-30℃，培養(yǎng)24小時，并用鏡檢的方法獨立判定所分離菌株是否為酵母菌。4.用劃線分離法對酵母菌進(jìn)行純化，要求每組挑取單個菌落，連續(xù)劃線分離4代，鏡下為單一純菌株，每組擴(kuò)繁10支斜面菌種，備用。四、實驗的準(zhǔn)備1、甘蔗、成熟葡萄或蘋果等果皮、0.1%美藍(lán)染液、1ml的無菌吸管、無菌培養(yǎng)皿等。　　2、馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基：　　原料：馬鈴薯（200克）、葡萄糖（20克）、瓊脂（15-20克）、蒸餾水（1000ml）?！　∨渲品椒ǎ海?）先將馬鈴薯去皮，切片，稱200克并加蒸餾水1000ml，煮沸半小時，用紗布過濾，補足蒸餾

4、水量至1000ml，制成20%的馬鈴薯汁?！　。?）在20%的馬鈴薯汁中加入瓊脂，煮沸溶化，補足水分并在115℃條件下高壓滅菌20分種。.............　?。?）加入葡萄糖，制成培養(yǎng)酵母菌的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基?！　?、乳酸馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)液：配方同上，但不加瓊脂而加乳酸，按每1000ml培養(yǎng)液中含5ml乳酸的量加入，并分裝試管?！　∥?、實驗設(shè)計　　l、接種：取一小塊果皮，不需沖洗，直接接入乳酸馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)液管中，置28-30℃，培養(yǎng)24小時，可見培養(yǎng)液變混濁?！　?、培養(yǎng)，用無菌吸管取上述培養(yǎng)后培養(yǎng)液0.lml，注入另一管乳酸馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)液中，置28

5、一30℃再培養(yǎng)24小時或稍長(過長則霉菌長出)?！　?、觀察：用無菌操作法取少許菌液置于載玻片中央的0.l%美藍(lán)染色液中，混勻后加蓋玻片制成水浸片，先用低倍鏡后換高倍鏡觀察酵母菌的形態(tài)和出芽生殖情況。　　活酵母菌可使美藍(lán)還原，從而使菌體不著色，用此方法可判斷酵母菌的死活?！　?、分離：馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基溶化后制成平板。用劃線法分離酵母菌培養(yǎng)液，從而得到單個菌落。挑取單個菌落反復(fù)再次劃線分離純化，最終可獲得純培養(yǎng)。六、實驗注意事項1.配制培養(yǎng)基時，應(yīng)注意瓊脂的加量，不同規(guī)格及批次的瓊脂的加量應(yīng)由實驗確定，不能照搬書上的加量。2.對培養(yǎng)基加熱時應(yīng)注意瓊脂的糊底與暴沸。3.

6、滅菌鍋操作時，首先應(yīng)注意水一定要加足夠，排氣要徹底，其次滅菌期間不要離開人，滅菌結(jié)束后，關(guān)閉電源，拔掉插頭，最后放氣一定要緩慢，均勻，氣放徹底才能開鍋，取鍋內(nèi)物品，應(yīng)小心，防止?fàn)C傷。4.接種前應(yīng)注意無菌工作臺的消毒與殺菌，接種時應(yīng)注意手與接種工具的消毒。七、實驗結(jié)果的觀察及記錄1.24小時，觀察試管內(nèi)培養(yǎng)液的情況并作記錄，每組轉(zhuǎn)接2支試管。2.48小時，觀察試管內(nèi)培養(yǎng)液的情況，鏡檢培養(yǎng)液內(nèi)菌的數(shù)量，粗略判斷是否為酵母菌并作記錄，每人蘸取培養(yǎng)液進(jìn)行劃線分離，并作記錄。3.72小時后，觀察培養(yǎng)皿內(nèi)菌的生長的情況，挑取單個菌落進(jìn)一步劃線分離，直到為純菌落。4.每組轉(zhuǎn)接10支斜面

7、試管，備用。八、實驗的延伸自然條件下釀造蘋果酒，葡萄酒、獼猴桃酒。七實驗報告要求.............1.實驗完畢后，每位同學(xué)都應(yīng)獨立作出實驗報告，實驗報告應(yīng)類似于小型論文格式。2.實驗報告內(nèi)容包括：（1）立題意義。（2）實驗設(shè)計。（3）實驗步驟詳細(xì)記錄。（4）對實驗結(jié)果的分析討論和總結(jié)。（5）實驗延伸。（6）實驗心得體會。附1：果酒的釀制方法—、目的要求了解果酒釀制原理，學(xué)習(xí)蘋果酒釀制技術(shù)。二、基本原理果酒是一類營養(yǎng)豐富、含酒精度低的上乘飲料。它是用含一定糖分和水分的果實壓汁，經(jīng)微生物發(fā)酵而成。其生化作用，除酒精發(fā)酵的主