酵母菌的分離及培養(yǎng)條件的優(yōu)化.ppt

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1、第二組實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)型實(shí)驗(yàn)酵母菌的分離及培養(yǎng)條件的優(yōu)化一、目的要求1、掌握培養(yǎng)基的配置及滅菌方法，能夠正確的配制培養(yǎng)基并在高壓滅菌鍋內(nèi)進(jìn)行滅菌。2、熟知培養(yǎng)基成分的選擇原則，能夠?qū)ε囵B(yǎng)基的成分和配比進(jìn)行優(yōu)化設(shè)計(jì)。3、掌握固體斜面、平板的制備技術(shù)，能夠通過劃線、涂布等方法分離菌種。4、熟知影響酵母菌生長繁殖各種培養(yǎng)條件，能夠?qū)u瓶培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化設(shè)計(jì)。5、了解酵母菌培養(yǎng)過程的代謝變化規(guī)律。掌握酵母菌培養(yǎng)過程參數(shù)的測(cè)定和分析方法。二、基本原理酵母菌是單細(xì)胞真菌生物，具有很高的營養(yǎng)價(jià)值，特別是含有較多蛋白質(zhì)、B族維生素、核酸和礦物質(zhì)，同時(shí)也能產(chǎn)生一些保健功能活性物

2、。因酵母屬于簡單的單細(xì)胞真核生物，易于培養(yǎng)，且生長迅速，被廣泛用于現(xiàn)代生物學(xué)研究中。是遺傳工程研究過程中常用的受體菌種。從自然界或商品中分離純的酵母菌株，通常采用平板或斜面涂布劃線法。這兩種方法簡單有效，是實(shí)驗(yàn)室分離純化菌種常用到的方法。在發(fā)酵過程中定時(shí)地取樣測(cè)定，包括對(duì)菌體進(jìn)行鏡檢、測(cè)定不同時(shí)期發(fā)酵液的菌體濃度、殘留的還原糖等參數(shù)，動(dòng)態(tài)地了解發(fā)酵過程中過程變量的變化，分析菌體生長、基質(zhì)消耗、產(chǎn)物生成的速度，研究發(fā)酵動(dòng)力學(xué)，為生產(chǎn)中優(yōu)化培養(yǎng)條件提供數(shù)據(jù)依據(jù)。三、實(shí)驗(yàn)材料（一）菌種：從安琪酵母中分離的酵母菌（二）培養(yǎng)基基礎(chǔ)培養(yǎng)基YPD：酵母浸粉1%蛋白胨

3、2%葡萄糖2%固體培養(yǎng)基再加瓊脂2%優(yōu)化N源培養(yǎng)基：酵母浸粉1%(NH4)2SO42%葡萄糖2%；酵母浸粉1%(NH4)2SO44%葡萄糖2%；酵母浸粉1%NH4NO32%葡萄糖2%；酵母浸粉1%NH4NO34%葡萄糖2%；酵母浸粉1%NaNO32%葡萄糖2%；酵母浸粉1%NaNO34%葡萄糖2%；（三）儀器設(shè)備超凈工作臺(tái)，756型分光光度計(jì)，旋轉(zhuǎn)式搖床，恒溫培養(yǎng)箱，全自動(dòng)滅菌鍋，三角瓶、涂布器、移液管、平皿等玻璃儀器。（四）試劑酵母浸粉、蛋白胨、葡萄糖、瓊脂(NH4)2SO42%、(NH4)2SO44%、NH4NO32%NH4NO34%、NaNO32

4、%、NaNO34%等；裴林試劑甲液、裴林試劑乙液；NaOH溶液、HCl等。四實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1、分離單菌落（1）實(shí)驗(yàn)物品滅菌儀器：包扎9個(gè)移液管、9個(gè)涂布器、9個(gè)裝有9ml蒸餾水的試管、16個(gè)平板、液體：3g酵母浸粉1%、6g蛋白胨2%、6g葡萄糖2%，配成300ml溶液，取240ml溶液平均分裝兩個(gè)三角瓶中，然后每個(gè)三角瓶放入2.4g瓊脂，剩下60ml為液體培養(yǎng)基，然后將以上設(shè)備拿去滅菌（2）劃線涂布超凈臺(tái)上：1、把240ml的培養(yǎng)基分別倒入15個(gè)平板，每個(gè)平板為12~13ml，平板分別標(biāo)10-2~10-10，還有倒一個(gè)斜面2、取1ml的菌原液進(jìn)行稀釋梯度為

5、10-3~10-103、劃線涂布劃線為原液從10-2~10-7；涂布從10-3~10-10用對(duì)應(yīng)的稀釋梯度液，10-2用原液涂布2、種子培養(yǎng)挑取單菌落接至種子瓶，進(jìn)行種子培養(yǎng)培養(yǎng)條件：將250ml三角瓶裝培養(yǎng)基60ml放入搖床，將轉(zhuǎn)速為180r/min,溫度為30度培養(yǎng)時(shí)間:12月4號(hào)早上10:37到12月5號(hào)早上8:47十個(gè)小時(shí)左右氮源的優(yōu)化方案1.常見的有機(jī)氮源:(NH4)2SO4.NH4NO3.NaNO32.準(zhǔn)備7個(gè)三角瓶分別裝入以下培養(yǎng)基然后定容至50ml1.酵母浸液0.5g(NH4)2SO41g葡萄糖1g2.酵母浸液0.5g(NH4)2SO4

6、2g葡萄糖1g(2)1.酵母浸液0.5gNH4NO31g葡萄糖1g2.酵母浸液0.5gNH4NO32g葡萄糖1g(3)1.酵母浸液0.5gNaNO31g葡萄糖1g2.酵母浸液0.5gNaNO32g葡萄糖1g3.對(duì)比試驗(yàn):酵母浸液0.5g蛋白胨1g葡萄糖1g4.配置完畢調(diào)PH值PH等于5為準(zhǔn)確包三個(gè)移液管然后將以上培養(yǎng)基一起拿去滅菌接種培養(yǎng)將種子液按9%的接種量接種到以下發(fā)酵瓶中（NH4）2SO42%+5ml種子液（NH4）2SO44%+5ml種子液NH4NO32%+5ml種子液NH4NO34%+5ml種子液NaNO32%+5ml種子液NaNO34%+5

7、ml種子液蛋白胨+5ml種子液培養(yǎng)時(shí)間9：20條件180r/min30℃的搖床測(cè)種子液的OD值將種子液稀釋10倍，以YPD培養(yǎng)液為標(biāo)準(zhǔn)液測(cè)其OD值測(cè)得OD值17.2%T取樣兩小時(shí)后（11：20）PH值均為6OD值:稀釋10倍原液(NH4)2SO42%0.117A1.018A(NH4)2SO44%0.105A0.863ANH4NO32%0.097A0.889ANH4NO34%0.061A0.830ANaNO32%0.130A0.845ANaNO34%0.143A0.836A對(duì)照0.178A1.180A測(cè)發(fā)酵瓶的PH值OD值及殘?zhí)橇恳恍r(shí)后（12：30）

8、PH值均為5OD值稀釋原液（NH4）2SO42%0.210A1.066A（NH4）2SO44%