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1、ARMS法ARMS法技術ARMS法與測序法比較ARMS原理ARMS應用目前，突變擴增阻滯系統(tǒng)（amplificationrefractorymutationsystem，ARMS）已成為國際上腫瘤個體化分子檢測最重要、最先進的技術之一，其在臨床應用中的優(yōu)勢已被業(yè)內專家廣泛認可。ARMS技術優(yōu)點ARMS方法檢測靈敏度明顯高于直接測序法等其他方法（表1），可檢測出樣品中含量低至0.1-1.0%的突變基因；該方法在設計上可以最大限度地縮短目標產物的長度，可以解決石蠟包埋組織標本提取的DNA大部分片段化而無法得到準確檢測結果的難點；該方法結合實
2、時PCR平臺實現擴增時閉管操作，操作簡單，無需產物的后處理，能最大程度地避免擴增產物的污染。表1ARMS法與測序法比較測序法ARMS法敏感度10-20%1%FFPE標本成功率低高商用試劑盒無有流程與速度復雜慢簡單快數據分析要求高低試劑成本低略高儀器成本高低假陽性機會（交叉污染）多少其中ARMS檢測可以分為實時熒光定量PCR和巢式ARMS法電泳檢測。實時熒光定量PCRARMS技術利用特異引物對突變靶序列進行高精準PCR擴增放大，與此同時，利用探針對擴增產物進行檢測，在實時熒光定量PCR平臺上實現對樣品DNA中稀有突變的檢測，以達到對基
3、因突變檢測的高特異性和高靈敏度。該技術所用探針為Scorpion探針，Scorpion探針是一種新型的探針，由一條發(fā)夾結構的探針和一條引物構成，探針的5'端和3'端分別標有報告熒光和淬滅熒光，3'端通過PCRblocker（一個非擴增的單體,防止探針退火后的延伸）與引物的5'端相連。在自由狀態(tài)，報告熒光和淬滅熒光很接近，不產生熒光。變性階段莖環(huán)結構打開，退火時引物與模板結合并延伸，環(huán)區(qū)與新合成的目的基因的互補區(qū)域結合，此時Scorpion探針與PCR產物在同一條DNA鏈上，是分子內的結合。由于發(fā)夾結構打開，報告熒光和淬滅熒光分離，因此可
4、檢測到報告熒光發(fā)出的熒光信號。由于Scorpion探針中序列特異性引物和探針在同一分子上，因此信號的產生特別快。巢式ARMS法電泳檢測利用PCR引物的3’端末位堿基必須與其模板DNA互補才能有效擴增的原理，設計等位基因特異性PCR擴增引物，在嚴格的條件下，只有在引物3’堿基與模板配對時才能出現PCR擴增帶，從而檢測出突變，該法省去了探針雜交操作。基本原理在PCR擴增時，引物的延伸是從其3"未端開始的，而這種延伸的進行要求引物3"端的堿基與模板需完全配對，只有這樣引物才能延伸，擴增才得以進行下去而得到預期的擴增產物，若引物3"端與模板不能
5、配對，則引物的延伸即阻斷，不能得到相對應的擴增產物，基于以上事實，可利用3"端含突變堿基的引物來檢測靶DNA中有無相應的突變位點，此即3"特異PCR，擴增阻滯突變系統(tǒng)及等位特異PCR.該反應系統(tǒng)包含兩個PCR擴增反應，有兩對引物但它們的3"端有差異，一為正常引物，另一為3"端編食突變的引物，正常引物只與正常模板互解，PCR時擴增相應的產物，而食突變的引物只與突變的模板附擴增出相應的產物.擴增完成后可直接同瓊脂糖電泳技術檢測分析結果。堿基配合、或錯配，決定PCR能不能進行PCR產物一邊長，而另一邊短，通過電泳，就可以方便地確定哪一邊擴出來
6、了，就是堿基配合的；反之，沒有擴出來的，那一邊引物的最后一個堿基是錯配的2組對稱的實驗，把最終的SNP型確定下來。利用該系統(tǒng)進行基因突變檢測時不僅能檢出突變的純合子，而且能檢出雜合子個體，在這種情況下，同一個體的DNA模板利用突變引物和正常引物均能引發(fā)擴增反應.尚可利用多對突變引物和正常引物進行多重3"-特異PCR，可攻DNA分子上的多位點變化的鑒定準確快速，簡便。應用目前利用ARMS法研發(fā)用于臨床的試劑盒有：人KRAS基因突變檢測試劑盒(Taqman-ARMS法)本試劑盒用于檢測大腸癌患者癌組織中KRAS基因的熱點突變情況，可定性檢測
7、KRAS基因外顯子2中第12密碼子(G12D(35G＞A)、G12A(35G＞C)、G12V(35G＞T))和13密碼子(G13D(38G＞A))的四個熱點突變位點。ARMS-PCR法四項耳聾基因檢測試劑盒近日，中生北控生物科技股份有限公司分子診斷試劑研發(fā)部開發(fā)的ARMS-PCR法四項耳聾基因檢測試劑盒經中檢所檢測，順利通過國家藥監(jiān)部門的審核，獲得國家食品藥品監(jiān)督管理局頒發(fā)的醫(yī)療器械注冊證，注冊號為：國食藥監(jiān)械（準）字2012第3400599號。四項耳聾基因檢測試劑盒用于定性檢測人血細胞中基因組DNA中與遺傳性耳聾相關的3個基因中的4個
8、突變位點，即GJB2基因235delC；SLC26A4基因IVS7-2A>G；線粒體12SrRNA基因1555A>G和1494C>T。這4個位點是中國人最常見的耳聾突變位點。通過對上述位點的檢測，比常規(guī)聽力
