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《BMSCs分離培養(yǎng)、純化及鑒定.doc》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。
1、BMSCs分離培養(yǎng)、純化及鑒定作者：馬民呂志剛杜以寬張桂娟馬義【摘要】目的建立一種持續(xù)、穩(wěn)定的可多向分化的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)體外分離培養(yǎng)體系。方法運(yùn)用密度梯度離心法從1月齡新西蘭兔骨髓中分離培養(yǎng)BMSCs,利用相差顯微鏡觀察其形態(tài)及生長(zhǎng)情況，掃描電鏡觀察其細(xì)胞結(jié)構(gòu)，運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)分析分離細(xì)胞群所處細(xì)胞周期和細(xì)胞活力，用MTT比色法繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，并用特定誘導(dǎo)液將分離的BMSCs向成骨細(xì)胞和成脂肪細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化，利用ALP和油紅0進(jìn)行染色鑒定。結(jié)果所分離的BMSCs細(xì)胞在形態(tài)學(xué)觀察與生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)上均符合B
2、MSCs特征，分離培養(yǎng)的BMSCs細(xì)胞在第3天進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，第10天進(jìn)入平臺(tái)期；在成骨、成脂肪的誘導(dǎo)培養(yǎng)條件下，分別出現(xiàn)成骨、成脂肪表型特征，可進(jìn)一步定向分化，結(jié)論所收獲的細(xì)胞具有BMSCs的特異性。【關(guān)鍵詞】骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞；分離；成骨分化；成脂分化[Abstract】ObjectiveToestablishasustainedandstablebonemarrowderivedmesenchymalstemcells(BMSCs)isolationandculturesystemwhichcouldbeplur
3、ipotentialinvitro.MethodsBMSCswereisolatedandculturedfromthe1montholdNewZealandwhiterabbitsthroughdensitygradientcentrifugatiori.GrowthandultromicrostructureoftheBMSCswereobservedbylightmicroscopeandscanelectronmicroscope?Thecellactivitiesandcellcyclewereobserv
4、edbyf1owcytometry.ThegrowcurveoftheBMSCswasdescribedthroughMTTassay.BMSCswereinducedanddifferentiateintoosteoblastsandadipocytesbyspecificinduetionculturemedium.Thenthecellswerestainedwithalkalinephosphatase(ALP)andOilred0,andanalyzedtheresuItofallstaining.Resu
5、ltsTheisolatedBMSCscellswereinlinewiththecharacteristicsofBMSCsinmorphologyandgrowthkinetics,andtheisolatedBMSCscellswouldbeintothelogarithmicgrowthphaseinthethirddayandintotheplatformphaseinthetenthday.ConclusionsIntheosteogenicandadipogenicinducedculturecondi
6、tions,BMSCshaveappearedthephenotypiccharacteristicsofosteogenicandadipogenicrespectively,andcouldbefurtherdirecteddifferentiation.TheseindicatedtheharvestedcellspossessedBMSCsspecificity.【Keywords]Bonemarrowderivedmesenchymalstemcells（BMSCs）；Isolation；Osteogeni
7、cdifferentiation；Adipogenicdifferentiation軟骨組織工程技術(shù)（自體軟骨細(xì)胞的移植、生長(zhǎng)因子對(duì)軟骨細(xì)胞的作用、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（又稱骨髓基質(zhì)干細(xì)胞，BMSCs）在軟骨組織工程中的作用、轉(zhuǎn)基因技術(shù)〕是當(dāng)今的研究熱點(diǎn)（1,2）0特別是自體BMSCs,因其低免疫原性、無(wú)限擴(kuò)增性及多向分化潛能等諸多優(yōu)點(diǎn)而引起廣泛關(guān)注，成為軟骨組織工程種子細(xì)胞的首選來(lái)源。本實(shí)驗(yàn)選擇合適的BMSCs體外分離、純化和擴(kuò)增方法，并通過(guò)形態(tài)學(xué)觀察（光鏡、電鏡）、細(xì)胞周期（流式細(xì)胞儀）、多細(xì)胞系（成骨細(xì)胞,脂肪細(xì)胞
8、）分化能力對(duì)其進(jìn)行鑒定，以期建立一種較理想的BMSCs培養(yǎng)體系，為BMSCs的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)和技術(shù)方法。1材料與方法1.1材料1月齡健康新西蘭兔，雌雄不限，由廣東省動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供（合格證號(hào)：2006A024）oPercoll細(xì)胞分離液購(gòu)自Pharmacia公司；4発乙基哌嗪乙磺酸（HEPES）和胰酶購(gòu)自Amersco公司；嗟哇蘭（MTT
