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《菌種鑒定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程.doc》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。
1、----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------菌種鑒定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程目的：建立菌種鑒定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程范圍：適用于******鑒定標(biāo)準(zhǔn)操作職責(zé)：內(nèi)容：1整體操作步驟1.1純化、分離待鑒定菌用接種環(huán)挑取待鑒定菌落或少許含菌溶液到相應(yīng)的培養(yǎng)基上（如TSA），劃線分離，以出現(xiàn)微生物單菌落為止。1.2挑取純化后的單菌落，進(jìn)行革
2、蘭染色、鏡檢，以確定待鑒定菌的革蘭屬性。1.3如鏡檢結(jié)果為革蘭陰性桿菌，則先進(jìn)行發(fā)酵實驗。如發(fā)酵實驗結(jié)果為陰性，則選用API20NE試劑條進(jìn)行鑒定；如發(fā)酵實驗結(jié)果為陽性，則在經(jīng)過細(xì)胞色素氧化酶實驗后選用API20E試劑條進(jìn)行鑒定。1.4如鏡檢結(jié)果為革蘭陽性球菌，則先進(jìn)行過氧化氫酶實驗。如實驗結(jié)果為陰性則選用APIStrep試劑條進(jìn)行鑒定，如實驗結(jié)果為陽性則選用APIStaph試劑條進(jìn)行鑒定。1.5假如鏡檢結(jié)果為革蘭陽性桿菌并且有內(nèi)生芽胞，則選用API50CHB試劑條進(jìn)行鑒定；否則，根據(jù)運動性實驗和過氧化氫酶實驗結(jié)果選用APICoryn
3、e或其他試劑條進(jìn)行鑒定。1.6選定正確的試劑條以后，根據(jù)不同的API試劑條的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程準(zhǔn)備接種物，進(jìn)行接種、培養(yǎng)等操作并將結(jié)果形成數(shù)碼，用API鑒定軟件鑒定或查詢待檢菌的名稱均可。鑒定結(jié)果應(yīng)記錄，必要時，給出相應(yīng)解釋。2革蘭氏染色2.1染色劑的配制2.1.1結(jié)晶紫染色液：甲液：結(jié)晶紫1.0g95%的酒精20ml乙液：草酸銨0.8g水80ml將甲液和乙液混合均勻，靜置48h使用，置密閉棕色瓶中儲存。---------------------------------------------------------------------
4、-------------------------------------------------------------------2.1.2碘液：碘1.0g碘化鉀2.0g水300ml配制時先用3～5ml水將碘化鉀溶解，再加入碘，用力搖勻，使之全部溶解后，再加水稀釋至300ml，搖勻，分裝在棕色瓶中儲存。2.1.3稀石碳酸紅溶液:堿性品紅1.0g石碳酸5.0ml95%乙醇10.0ml配制時用乙醇溶解堿性品紅，然后加入石碳酸溶液，使用時加水稀釋至100ml，搖勻。2.2操作:2.2.1涂片：用接種環(huán)挑取液體培養(yǎng)物中菌體在載玻片上涂成薄
5、層，固體培養(yǎng)物則先在載玻片上滴一滴蒸餾水或生理鹽水，用接種環(huán)挑取少量菌體在載玻片上涂成薄層。2.2.2干燥固定：涂片自然干燥或在酒精燈火焰上方微熱烘干，并在火焰上通過2～3次，以固定涂片。2.2.3染色：在已固定的標(biāo)本上滴加結(jié)晶紫溶液數(shù)滴，使染色液覆蓋整個涂片標(biāo)本，染色1分鐘。2.2.4水洗：斜置玻片使很細(xì)水流的純化水從染色標(biāo)本的上端流下，勿使水流直接沖刷涂片處，直至洗下的水呈無色為止。2.2.5滴加碘液沖去殘水并媒染約1分鐘，用純化水沖去碘液吸干。2.2.6滴加95%的乙醇脫色約20～30秒，脫色時應(yīng)將玻片微振動，使酒精分布均勻，立
6、即用水沖凈。2.2.7稀石碳酸紅溶液染色1分鐘后，用水洗凈晾干或吸干。2.2.8鏡檢：先用低倍鏡觀察，找到適合的位置，再加一滴香柏油于涂片上，使用100倍物鏡觀察細(xì)菌革蘭氏屬性。革蘭氏陽性菌染色成藍(lán)紫色，革蘭氏陰性菌染成紅色，同時做陽性對照。3簡單染色3.1用于真菌與細(xì)菌的鑒別。----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
7、------3.2操作:3.2.1涂片：用接種環(huán)挑取液體培養(yǎng)物中菌體在載玻片上涂成薄層，固體培養(yǎng)物則先在載玻片上滴一滴蒸餾水或生理鹽水，用接種環(huán)挑取少量菌體在載玻片上涂成薄層。3.2.2干燥固定：涂片自然干燥或在酒精燈火焰上方微熱烘干，并在火焰上通過2～3次，以固定涂片。3.2.3染色：在已固定的標(biāo)本上滴加結(jié)晶紫溶液數(shù)滴，使染色液覆蓋整個涂片標(biāo)本，染色1分鐘。3.2.4水洗：斜置玻片使很細(xì)水流的自來水從染色標(biāo)本的上端流下，勿使水流直接沖刷涂片處，直至洗下的水呈無色為止，自然晾干或吸干。3.2.5鏡檢：先用低倍鏡觀察，找到適合的位置，再
8、加一滴香柏油于涂片上，使用100倍物鏡觀察菌體形態(tài)。43%氫氧化鉀試驗4.1材料3%KOH溶液（W/V）、無菌木質(zhì)牙簽、待檢菌的新鮮純培養(yǎng)物（18～24小時）。4.2操作4.2.1在一潔凈的載玻片上等距離滴上3滴3%KO
