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1、學(xué)校代碼：10564學(xué)號(hào)：2013202820分類號(hào)：S855.9密級(jí)：碩士學(xué)位論文幾種異尖科線蟲線粒體基因組序列測定及系統(tǒng)發(fā)育研究劉珊珊指導(dǎo)教師：翁亞彪副教授學(xué)院名稱：獸醫(yī)學(xué)院專業(yè)名稱：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)答辯委員會(huì)主席：李國清教授中國·廣州2016年6月華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的研究成果。除了文中特別加以標(biāo)注引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫的作品成果。對本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。作者簽名：日期：學(xué)位論
2、文提交同意書本學(xué)位論文符合國家和華南農(nóng)業(yè)大學(xué)關(guān)于研究生學(xué)位論文的相關(guān)規(guī)定，達(dá)到學(xué)位授予要求，同意提交。導(dǎo)師簽名：日期：學(xué)科帶頭人簽名：日期：摘要異尖線蟲主要寄生于海魚、海洋哺乳動(dòng)物、海鳥和人類，呈世界性分布。人體異尖線蟲病主要是食入含有某些異尖科線蟲活的三期幼蟲的海魚所引起的一種食源性疾病，可引起人的急腹癥和過敏性癥狀。目前，已報(bào)道可引起人體異尖線蟲病的蟲種主要有4個(gè)屬：即異尖線蟲屬（Anisakis）、對盲囊線蟲屬（Contracaecum）、偽地新線蟲屬（Pseudoterranova）和宮脂線蟲屬（Hysterothylacium）。對異尖線蟲進(jìn)行準(zhǔn)確的鑒定和分類
3、是診斷、防治和控制異尖線蟲病的前提和基礎(chǔ)。由于形態(tài)學(xué)（易受環(huán)境影響）和少量基因片段序列（缺乏有效的遺傳信息位點(diǎn)）在分類上的局限性，異尖科線蟲分類和其高級(jí)階元的系統(tǒng)發(fā)育仍頗具爭議。線粒體基因組序列是研究寄生蟲分子分類、群體遺傳、系統(tǒng)進(jìn)化的一種很好的分子標(biāo)記，然而關(guān)于異尖科這一重要類群線粒體基因組的研究較少，目前僅4種異尖科線蟲線粒體基因組被解碼。本研究的第一部分是對偽地新線蟲復(fù)合種（Pseudoterranovadecipienscomplex）線粒體全基因組進(jìn)行長PCR擴(kuò)增，測序得到6種偽地新線蟲線粒體全基因組,分別為P.azarasi13,954bp；P.bulbos
4、a13,957bp；P.cattani13,950bp；P.decipienss.l13,965bp；P.decipienss.s13,962bp；P.krabbei13,948bp（GenBank注冊號(hào)為NC_027163，KU558720，KU558721，KU558722，KU558723和KU558724），均含有36個(gè)基因，其中12個(gè)蛋白編碼基因，22個(gè)tRNA基因以及2個(gè)rRNA基因，且與其它線蟲一樣缺乏atp8基因，所有基因均為單向轉(zhuǎn)錄。6個(gè)偽地新線蟲線粒體基因組的序列差異在3.8～9.4%之間，12個(gè)蛋白質(zhì)編碼基因的核苷酸和氨基酸序列的差異性分別在3.8
5、～25.8%和1.7～9.1%之間。在12個(gè)編碼蛋白質(zhì)的基因中，多以ATT、ATA和TTG作為蛋白質(zhì)翻譯的起始密碼子，以TAA和TAG作為終止密碼子，而cox1，cox2，cox3，nad5和nad4L基因在蛋白質(zhì)翻譯終止時(shí)使用了不完整密碼子T和TA。基于線粒體全基因組蛋白編碼基因的氨基酸串聯(lián)序列，利用Bayes、MP和ML法對偽地新線蟲及其它24種蛔蟲進(jìn)行了系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系重建，結(jié)果顯示：三種方法所繪制的進(jìn)化樹拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)一致，證實(shí)了偽地新線蟲復(fù)合種包含了6個(gè)種，且偽地新屬與異尖屬的親緣關(guān)系較近而與對盲囊屬的親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。本研究的第二部分對歐氏對盲囊線蟲復(fù)合種（Contrac
6、aecumogmorhini）線粒體全基因組進(jìn)行長PCR擴(kuò)增，測序得到3個(gè)歐氏對盲囊線蟲線粒體全基因組,分別為來自南半球南非的Arctocephaluspusilluspusillus（樣本代碼CoAPP），澳大利亞的IArctocephaluspusillusdoriferus（樣本代碼CoAPD）和來自北半球加拿大的海獅Zalophuscalifornianus（樣本代碼CoZC），線粒體基因組全長分別為為14,012bp，14,019bp和14,010bp（GenBank注冊號(hào)KU558725，KU558726和KU558727），共包含36個(gè)基因，其中12個(gè)蛋白
7、編碼基因，22個(gè)tRNA基因以及2個(gè)rRNA基因。序列分析表明CoAPD和CoAPP線粒體基因組差異性為0.6％（93個(gè)核苷酸替換），CoAPP和CoZC線粒體基因組差異性為1.7％（244個(gè)核苷酸替換），CoAPD和CoZC線粒體基因組差異性為1.7％（243個(gè)核苷酸替換）；對蛋白質(zhì)編碼基因的核苷酸和氨基酸序列進(jìn)行分析，CoAPD和CoAPP的差異為0.6%和0.9%，CoAPP和CoZC的差異為1.8%和1.1%，CoAPD和CoZC的差異為1.8%和1.0%。且對于歐氏對盲囊線蟲系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系的研究結(jié)果顯示南北半球歐氏對盲囊線蟲的親緣
