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1、結(jié)核病實驗室生物安全及菌株運輸1內(nèi)容一、結(jié)核病實驗室生物安全二、結(jié)核菌株或樣本運輸三、風(fēng)險評估2一、結(jié)核病實驗室生物安全3結(jié)核桿菌的生物學(xué)性狀1、結(jié)核桿菌為細(xì)長略帶彎曲的桿菌，約1-4×0.3-0.6μm，常聚集成團，牛型比人型略粗短；2、分枝桿菌屬的細(xì)菌細(xì)胞壁脂質(zhì)含量較高，約占干重的60%，特別是其中的大量分枝菌酸可影響染料的穿入；3、一般用萋-尼（ZiehlNeelsen）抗酸性染色法，以5%石炭酸復(fù)紅加溫染色后可以染上，但著色后不易被鹽酸酒精脫色；4結(jié)核桿菌的生物學(xué)性狀4、若再加用美藍復(fù)染，則分枝桿菌呈紅色，而其它細(xì)菌及背景中的物質(zhì)為藍色；5、專性需
2、氧，最適溫度為37℃，低于30℃或高于42℃均不生長；營養(yǎng)要求較高，生長緩慢，初次分離需要營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基。常用的有Lowenstein-Jensen培養(yǎng)基，內(nèi)含蛋黃、甘油、無機鹽和孔雀綠等。6、細(xì)胞壁的脂質(zhì)含量較高，影響營養(yǎng)物質(zhì)吸收，故生長緩慢，在一般培養(yǎng)基中每分裂一代需要10多個小時，在人體內(nèi)需24-36小時；5結(jié)核桿菌的生物學(xué)性狀7、一般10-30天可見菌落生長，菌落呈顆粒、結(jié)節(jié)或花菜狀，乳白色或米黃色，不透明；8、結(jié)核桿菌細(xì)胞壁中含有大量脂質(zhì)，可防止菌體水分的丟失，故對干燥的抵抗力特別強，沾附在塵埃上保持傳染性8-10天，在干燥痰內(nèi)可存活6-8個月
3、；9、結(jié)核桿菌對濕熱敏感，在液體中加熱62-63℃后15分鐘或煮沸即被殺死；6結(jié)核桿菌的生物學(xué)性狀10、結(jié)核桿菌對紫外線敏感，直接日光照射數(shù)小時可被殺死，可用于結(jié)核患者衣服、書籍等的消毒；11、結(jié)核桿菌的抵抗力與環(huán)境中有機物的存在有密切關(guān)系，如痰液可增強結(jié)核桿菌的抵抗力，因大多數(shù)消毒劑可使痰中的蛋白質(zhì)凝固，包在細(xì)菌周圍，使細(xì)菌不易被殺死；12、5%的石炭酸在無痰時30分鐘可殺死結(jié)核桿菌，有痰時需要24小時；5%的來蘇兒無痰時5分鐘殺死結(jié)核桿菌，有痰時需要1-2小時；7結(jié)核桿菌的生物學(xué)性狀13、結(jié)核桿菌對酸（3%HCL）或堿（4%NaOH）有抵抗力，15分鐘
4、不受影響，可在分離培養(yǎng)時用于處理有雜菌污染的標(biāo)本和消化標(biāo)本中的粘稠物質(zhì)；14、結(jié)核桿菌對1：75000結(jié)晶紫或1：13000孔雀綠有抵抗力，加在培養(yǎng)基中可抑制雜菌生長；15、結(jié)核桿菌對鏈霉素、異煙肼、利福平、環(huán)絲氨酸、乙胺丁醇、卡拉霉素、對氨水楊酸等敏感，但長期用藥容易出現(xiàn)耐藥性，而吡嗪酰胺的耐藥性<5%。8實驗室安全操作—原則1、實驗室應(yīng)按等級要求完善實驗設(shè)施，如生物安全柜的抽風(fēng)排風(fēng)功能、紫外燈消毒、生物安全柜內(nèi)的除菌濾膜定期更換等；2、普通實驗室應(yīng)注意氣流方向，實驗過程中盡量避免強氣流變化而產(chǎn)生氣溶膠（如：人員走動等）；3、易產(chǎn)生氣溶膠或出現(xiàn)濺出的操作
5、,如涂片、離心或其它操作，應(yīng)在BSL-2實驗室的Ⅱ級生物安全柜中進行，并使用個體防護設(shè)備；94、盡可能減少使用注射器針頭，實驗中使用注射器時，用過的針頭切勿再重新入套或拔開注射器與針頭，應(yīng)直接放入銳氣收集器，以免劃破皮膚造成接種感染；5、試驗結(jié)束后，操作過程中所有可能與生物危險物接觸或被污染的實驗器械或物品，能夠高壓的必須進行高壓消毒；6、實驗中發(fā)生意外污染情況，應(yīng)立即報告。實驗室安全操作—原則10實驗室安全操作-意外事故處理1、實驗過程中，如標(biāo)本或含標(biāo)本的前消化處理液被打翻，污染操作臺或地面，應(yīng)以吸滿75％乙醇溶液的衛(wèi)生紙覆蓋污染區(qū)，15分鐘后衛(wèi)生紙方可
6、移去；2、實驗過程中，如污染物濺落到身體表面，或有割傷、刺傷、燒傷、燙傷等情況發(fā)生，應(yīng)立即停止實驗并進行緊急處理；更換被污染的工作服，皮膚表面用消毒液清洗，傷口以碘酒及酒精消毒，眼睛用無菌生理鹽水沖洗；3、被污染的器械等立即浸泡于含氯消毒劑或75％乙醇等溶液中，實驗完成后再進行高壓消毒處理；4、如果發(fā)生氣溶膠污染或大面積污染，應(yīng)立即停止實驗并關(guān)閉實驗室，對實驗區(qū)域和實驗室進行紫外燈照射消毒2小時以上；對污染區(qū)域進行空氣熏蒸消毒。11實驗室安全操作-絕對禁止的處理方法1、有可能造成污染面積擴大，如使用75％乙醇或甲酚皂液擦洗被污染的區(qū)域；2、直接用火焰對未經(jīng)
7、任何處理的污染地面、操作臺、器械進行燒灼處理；3、使用消毒效果未經(jīng)證實的消毒劑進行消毒；4、使用低濃度的消毒劑和紫外燈進行短時間、長距離照射消毒。12實驗室消毒與滅菌1、物理消毒：紫外線、高壓滅菌2、化學(xué)消毒：乙醇、過氧乙酸、苯酚、含氯消毒劑3、注意事項13物理消毒—紫外線1、紫外線對結(jié)核桿菌有一定的殺滅作用，用輻射強度在100μw/cm2以上的30W紫外線燈、相對濕度50%～70%的條件下，照射40min以上，對空氣中結(jié)核桿菌的殺滅效果可達99.9%以上；2、在液層厚度3mm含菌107～108cfu/ml的結(jié)核桿菌的菌懸液，用10W紫外線燈在距離0.5m
8、處持續(xù)照射3分鐘，在距離1m處持續(xù)照射10分鐘后，菌懸液經(jīng)培養(yǎng)無活
