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《淺析神經(jīng)干細(xì)胞的鑒定、增殖分化調(diào)控與培養(yǎng).doc》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、淺析神經(jīng)干細(xì)胞的鑒定、增殖分化調(diào)控與培養(yǎng)摘耍：神經(jīng)生物學(xué)的重婆進(jìn)展Z—是發(fā)現(xiàn)神經(jīng)干細(xì)胞的存在，它們在體外可以被生長因子誘導(dǎo)而增殖，并保持分化成神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞的潛能，移植后能在宿主的神經(jīng)紐織屮牛存、整合和分化，并且基因轉(zhuǎn)染后可表達(dá)外源基因產(chǎn)物，科研工作者正試圖從神經(jīng)干細(xì)胞所具有的這些屬性來探討將神經(jīng)干細(xì)胞作為屮樞神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)冇、神經(jīng)系統(tǒng)移植以及神經(jīng)系統(tǒng)替代治療的理想材料。關(guān)鍵詞：神經(jīng)T細(xì)胞；增殖分化；細(xì)胞分化，神經(jīng)元1神經(jīng)干細(xì)胞的鑒定根據(jù)國外Lcndah的報道，神經(jīng)干細(xì)胞冇一種中間絲狀蛋白，也就是指的巢蛋白
2、或者神經(jīng)上皮十細(xì)胞蛋白，其實是一?種特有的生物學(xué)標(biāo)記，F(xiàn)1前它被廣泛地應(yīng)用于神經(jīng)干細(xì)胞的免疫組織化學(xué)鑒定，這是因為在成熟神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞中并無此蛋白表達(dá)°Nestin蛋白的表達(dá)始于神經(jīng)胚形成時，主要分布于細(xì)胞的胞漿和突起，當(dāng)神經(jīng)細(xì)胞的遷移基本完成后，NeS七in蛋片的表達(dá)量便逐漸減少，并隨著神經(jīng)干細(xì)胞分化的最示完成而停止表達(dá)。5一濱脫氧尿普(BromodCoxyuridine,Brdu)K實就是一種胸腺嚓嚨脫氧核昔類似物，它在細(xì)胞增殖周期中的DNA合成期嵌入DNA中，因此可被用于檢測分裂細(xì)胞，證實新生細(xì)胞的存在，Brdu陽性
3、增殖細(xì)胞大多是反應(yīng)性增牛:細(xì)胞及過披性增殖細(xì)胞，Brdu是一?種經(jīng)常使用的增殖細(xì)胞標(biāo)記物。在免疫組織化學(xué)實驗中比較常用的還冇Musashil,它其實就是一種神經(jīng)元的RNA結(jié)合蛋白，迄今為止已發(fā)現(xiàn)它基木存在于各種動物，它也被用于鑒定神經(jīng)干細(xì)胞的存在。國外也有報道曾經(jīng)使用鼠單克隆抗體進(jìn)行實驗，結(jié)來就發(fā)現(xiàn)Mabl4HI和14B8抗體能識別各種脊椎動物大腦內(nèi)的神經(jīng)干細(xì)胞。另外，早期實驗指出CD133其實也是神經(jīng)干細(xì)胞的基本標(biāo)記(Cenmarker)之一。CD34雖然是肝干細(xì)胞和造血干細(xì)胞的標(biāo)記，到目前為止并未見CD34在神經(jīng)干細(xì)胞屮
4、的表達(dá)。事實上，由于神經(jīng)干細(xì)胞/而體細(xì)胞多處于原始靜止?fàn)顟B(tài)，這種狀態(tài)下，它的一?些特界性標(biāo)記(抗原)未能表達(dá)，因而如何有效確定神經(jīng)干細(xì)胞的標(biāo)記，進(jìn)而客觀、合理鑒定神經(jīng)千細(xì)胞，仍存在一些困難。UChida等曾經(jīng)從人胚胎屮分離出了所謂的神經(jīng)干細(xì)胞，他所使用的方法其實就是抗細(xì)胞表面標(biāo)志抗原和熒光激活的細(xì)胞篩選法。口前，有眾多的神經(jīng)干細(xì)胞研究領(lǐng)域的科學(xué)家止在集中于神經(jīng)干細(xì)胞鑒定方面的研究，預(yù)期在不久的將來，將能尋找到神經(jīng)干細(xì)胞更為特界性的標(biāo)記物，也必然能通過一定的方法將處于最原始、靜止?fàn)顟B(tài)的神經(jīng)T細(xì)胞分離、鑒定出來。2神經(jīng)干細(xì)胞增殖
5、、分化的影響、調(diào)控因素早在1992年，Reynold和WeiSS就利用內(nèi)皮生長因子(epidermalgrowthfaCtor,EGF)成功培養(yǎng)了成年哺乳動物的神經(jīng)干細(xì)胞。RIChardS和Johc等人則利用堿性成纖維細(xì)胞生長因子(basiCfibroblastgrowthfaCtor,bFGF)培養(yǎng)出成年鼠的神經(jīng)干細(xì)胞。Angela等比較了這兩種有絲分裂調(diào)控因子的不同點，驗證了兩者之間的線性關(guān)系，發(fā)現(xiàn)來源于室管膜下區(qū)的神經(jīng)T細(xì)胞在培養(yǎng)時對兩者的反應(yīng)無顯著差開;但如果細(xì)胞于EGF中生長緩慢時，加入bFGF可促進(jìn)細(xì)胞增殖的速度
6、;反Z亦然。Shilnazaki等曾證實LIF對培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞具有促進(jìn)增殖和抑制分化的作用。國外Winkler認(rèn)為神經(jīng)干細(xì)胞具有向星形膠質(zhì)細(xì)胞分化的趨向性，這可能也是通常情況下神經(jīng)十細(xì)胞處于靜息狀態(tài)但當(dāng)神經(jīng)組織損傷后神經(jīng)干細(xì)胞主要向星形膠質(zhì)細(xì)胞分化參與膠質(zhì)癱痕形成的原因。但是含血清完全培養(yǎng)基的成分復(fù)雜，不便于我們研究細(xì)胞因了對神經(jīng)千細(xì)胞分化的特異性作用，而無血清條件培養(yǎng)基的建立則解決了這一問題，BFGF、EGF與BDNF、GDNF、工GF等対神經(jīng)T細(xì)胞分化有明顯作用的細(xì)胞因子和比它們無組織來源的特異性存在于體內(nèi)的多種組織屮，
7、對多種紐織細(xì)胞均有明顯的促進(jìn)存活和増殖作川，也是目前用于擴增不同部位神經(jīng)干細(xì)胞常用的絲裂原。研究表明經(jīng)bFGF或EGF擴增的神經(jīng)干細(xì)胞在分化方向上冇明顯差異，bFGF作用的了代細(xì)胞分化后大多數(shù)表達(dá)神經(jīng)元特異性抗原標(biāo)記NSE和MAP一2,IfljEGF作用的子代細(xì)胞分化后大多數(shù)為膠質(zhì)細(xì)胞前體細(xì)胞。當(dāng)前有一種觀點認(rèn)為，神經(jīng)干細(xì)胞之所以能在休內(nèi)分裂、增殖并分化，有賴于在發(fā)育過程屮對其進(jìn)行精確調(diào)控的某種時空模式，當(dāng)然，這一過程也必然依賴于各種生長因了的協(xié)同作用。BFGF和EGF是兩種較為廣譜的神經(jīng)營養(yǎng)因子，根據(jù)研究結(jié)果，認(rèn)為它們既能
8、促進(jìn)細(xì)胞分化，也能決定細(xì)胞分化，當(dāng)然它們還是有絲分裂原，BFGF和EGF生長因子作用的神經(jīng)干細(xì)胞最終多數(shù)會分化形成r一氨基丁酸能的神經(jīng)元。張曉梅等觀察到bFGF與EGF聯(lián)合應(yīng)丿IJ可以直接誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞分化，盡管分化的比例每個細(xì)胞團(tuán)均有所不同，但是星形膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量始終
