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《埃博霉素B的發(fā)酵工藝研究.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、論文題目：跨壓料技大箏埃博霉素B的發(fā)酵工藝研究學科門類：工學一級學科：輕工技術與工程培養(yǎng)單位：生命科學與工程學院碩士生：王娜導師：龔國利2014年5月STUDIESoNFERMENTATIoNPRoCESSFoRPRoDUCINGEPoTHILoNEBAThesisSubmittedtoShaanxiUniversityofScienceandTechnologyinPartialFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeofMasterof娶望gi旦曼竺￡i望
2、gThesisSupervisor：ProfessorGongGuo--li一■■———————————————●■■■●■■■■●●■■●■■■■■■●-May2014埃博霉素B的發(fā)酵工藝研究摘要埃博霉素B(EpothiloneB)是粘細菌纖維堆囊菌產生的大環(huán)內酯類次級代謝產物，是一種新型的抗腫瘤藥物。其作用機制與紫杉醇相同，通過促微管聚合作用從而抑制腫瘤細胞的增殖，并且與紫杉醇相比，埃博霉素具有水溶性更好，可以通過微生物發(fā)酵生產等優(yōu)點，因此埃博霉素被譽為最具有潛力的抗腫瘤新藥之一。然而埃博霉素
3、B發(fā)酵產量較低且不穩(wěn)定，為了提高埃博霉素B產量，本文對埃博霉素B發(fā)酵工藝進行研究。以纖維堆囊菌(Sorangiumcellulosum)SoF5：76為生產菌株，首先對其發(fā)酵培養(yǎng)基和發(fā)酵條件進行優(yōu)化，然后開展了基于生物合成途徑的埃博霉素B發(fā)酵工藝優(yōu)化研究，最后在5L發(fā)酵罐上建立菌株的分批發(fā)酵動力學模型。主要的研究結果如下：(1)在單因素試驗的基礎上，利用Plackett．Burman篩選出對埃博霉素B產量有顯著影響的三個因素為馬鈴薯淀粉，脫脂奶粉和無水氯化鈣。然后通過最陡爬坡試驗逼近最佳響應面區(qū)域
4、，再運用Box．Behnken試驗設計和響應面分析法進行回歸分析，確定重要因素的最優(yōu)濃度，最終得到最佳發(fā)酵培養(yǎng)基為：馬鈴薯淀粉3．99／L，脫脂奶粉2．29／L，無水氯化鈣1．39／L，葡萄糖19／L，豆餅粉1．59in，七水硫酸鎂2．59／L，EDTA．Fe3+3mL／L，微量元素(TE)O．5mL／L，VB】2O．5mg／L。在此最優(yōu)條件下發(fā)酵埃博霉素B的產量為29．95mg／L，發(fā)酵產量比優(yōu)化前提高了1．1倍。(2)采用單因素試驗和正交試驗設計，對產埃博霉素B的發(fā)酵條件進行了優(yōu)化，確定了最優(yōu)
5、發(fā)酵條件為初始pH7．4，裝液量50mL／250mL，轉速200r／min，種齡60h，接種量10％，溫度30℃，發(fā)酵周期6d。在此最優(yōu)發(fā)酵條件下，埃博霉素B的產量為35．24mg／L，比優(yōu)化前提高了17．67％。(3)根據(jù)已知的埃博霉素B的合成途徑，采用單因素法考察了前體物質、一氨基酸類以及輔酶生物素對埃博霉素B合成的影響，然后通過Plackett．Burman設計對埃博霉素B有促進作用的因子進行了篩選，結果表明：丙酸鈉，L一異亮氨酸，L一甲硫氨酸三個因素對埃博霉素B產量有顯著影響。最后通過Bo
6、x．Behnken設計和響應面分析法進行回歸分析，確定出重要因素的最優(yōu)濃度為：丙酸鈉0．99／L，L．異亮氨酸15．2mg／L，L．甲硫氨酸29．3mg／L。在此最優(yōu)條件下，埃博霉素B的產量可達到49．37mg／L，發(fā)酵產量比優(yōu)化前提高了38．29％。(4)建立了菌株在5L發(fā)酵罐中的細胞生長、產物生成以及基質消耗的動力學模型。關鍵詞：埃博霉素B；纖維堆囊菌；發(fā)酵優(yōu)化；響應面法；發(fā)酵動力學STUDIESoNFERMENTATIoNPRoCESSFoRPRoDUCINGEPoTHILoNEBABSTR
7、ACTEpothiloneswhicharesecondarymetabolitesnaturallyproducedbythemyxobacteriumSorangiumcellulosumhaveattractedconsiderableattentioninrecentyearsasanovelanticanceragents．Theyshareamechanismofactionsimilartothatofantitumordrugpaclitaxel(Tax01)intheirabil
8、itytostabilizemicrotubuleandleadtocelldeath．AndepothiloneshavesuperiorfeaturesrelativetoTax01．Theyaremorewatersoluble，andcanbeproducedbymicrobialfermentation．Therefore，epothilonesareknownasoneofthemostpotentialanti-tumoragent．HoweveLthelowandu
