平板菌落計數(shù)法操作步驟.doc

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1、平板菌落計數(shù)法一、目的要求學(xué)習(xí)平板菌落計數(shù)的基本原理和方法。二、基本原理平板菌落計數(shù)法是將等測樣品經(jīng)適當(dāng)稀釋后，其中的微生物充分分散為單個細(xì)胞，取一定量的稀釋液接種到平板上，經(jīng)過培養(yǎng)，由每個單細(xì)胞生長繁殖而形成的肉眼可見的菌落，即一個單菌落應(yīng)代表原樣品中的一個單細(xì)胞。統(tǒng)計菌落數(shù)，根據(jù)其稀釋倍數(shù)和取樣接種量即可換算出樣品中的含菌數(shù)。但是，由于待測樣品往往不易完全分散成單個細(xì)胞，所以，長成的一個單菌落也可能來自樣品中的2~3或更多個細(xì)胞。因此平板菌落計數(shù)的結(jié)果往往偏低?，F(xiàn)在常使用菌落形成單位。該計數(shù)法的缺點是操作較繁，結(jié)果需要培養(yǎng)一段

2、時間才能取得，而且測定結(jié)果易受多種因素的影響，但是這種計數(shù)方法最大的優(yōu)點是可以獲得活菌的信息，所以被廣泛用于生物制品檢驗，以及食品、飲料和水等含菌指數(shù)或污染度的檢測。三、器材大腸桿菌懸液，LB瓊脂培養(yǎng)基，1mL、5mL無菌吸管，無菌平皿，無菌水，無菌試管，試管架和記號筆等。四、操作步驟1、編號取無菌平皿9套，分別標(biāo)明為10-4、10-5、10-6各三套，另取6支無菌試管分別標(biāo)記為10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。2、稀釋用1mL無菌吸管吸取1mL已充分混勻的大腸桿菌菌懸液，精確地放0.5mL至10-1的試

3、管中，此即為10倍稀釋，將多余的菌液放回原菌液中。將10-1試管充分振蕩、混勻。另取一支1ml吸管插入10-1試管中來回吹吸菌液三次，進一步將菌體分散、混勻。動作不要太猛太快，吸時插入，吹時提出，再用此吸管吸取10-1菌液1mL，精確地放0.5mL至10-2試管中，此即為100倍稀釋，依次類推，3、取樣用三支1ml無菌吸定分別吸取10-4、10-5、10-6的稀釋菌懸液各1mL，對號放入編好號的無菌平皿中，每個平皿放0.2mL4、倒平板盡快向上述盛有不同稀釋菌液的平皿中倒入融化后冷卻至45度的LB培養(yǎng)基約15-20ml，置水平位置

4、迅速旋動平皿，使培養(yǎng)基與菌液混合均勻。5、培養(yǎng)倒置于37度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時，6、計數(shù)算出同一稀釋度三個平板上的菌落平均數(shù)，并按下列公式進行計算；每毫升中菌落形成單位（cfu）=同一稀釋度三次重復(fù)的平均菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)×5五、實驗報告1、結(jié)果將培養(yǎng)后菌落計數(shù)結(jié)果填入下表：稀釋度10-410-510-6123平均123平均123平均Cfu數(shù)/平板????????????每毫升的cfu數(shù)???2、思考題(1)為什么溶化后的培養(yǎng)基要冷卻至45℃左右才能倒平板？(2)要使平板菌落計數(shù)準(zhǔn)確，需要掌握哪幾個關(guān)鍵？為什么？(3)同一種菌液用血

5、球計數(shù)板和平板菌落計數(shù)法同時計數(shù)，所得結(jié)果是否一樣？為什么？(4)試比較平板菌落計數(shù)法和顯微鏡下直接計數(shù)法的優(yōu)缺點。