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《實驗三霉菌、放線菌及土壤中微生物的分離純化.ppt》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在教育資源-天天文庫。
1、實驗三放線菌、霉菌的形態(tài)觀察 及微生物的分離純化一、實驗目的觀察放線菌、霉菌的形態(tài)結構特征學習掌握霉菌染色的基本方法基本掌握細菌、放線菌、酵母菌、霉菌菌落形態(tài)特征實驗（一）放線菌、霉菌的形態(tài)觀察二、實驗原理1、放線菌：放線菌是介于細菌與絲狀真菌之間而又接近于細菌的一類絲狀原核生物，因菌落呈放射狀而得名。放線菌的菌落在培養(yǎng)基上著生牢固，不易被接種針挑取，由于孢子的存在，常使菌落表面呈粉末狀。它和細菌單染色一樣，可用石炭酸復紅和呂氏美藍等染料著色后，在顯微鏡下觀察它們的形態(tài)。放線菌是由不同長短的纖細的菌絲所組成的單細胞菌絲體，菌絲內無隔膜，菌絲體分
2、為兩部分，即潛入培養(yǎng)基中的營養(yǎng)菌絲（基內菌絲）和有營養(yǎng)菌絲向上生長的氣生菌絲，有些氣生菌絲分化成各種孢子絲，呈螺旋狀、波浪形或分枝狀等，著生形式有叢生、互生和輪生三種。孢子的表面光滑或粗糙，圓或橢圓和干形。孢子有各種顏色。這些形態(tài)特點都是鑒別放線菌的重要依據。⑴營養(yǎng)菌絲：又叫初級菌絲體或一級菌絲體，匍匐生長于培養(yǎng)基內，主要生理功能是吸收營養(yǎng)物，故亦稱基內菌絲。營養(yǎng)菌絲一般無隔膜，直徑0.2—0.8μ，但長度相差很大，短的小于100μ，長的可達600μ以上，有的無色素，有的產生黃、橙、紅、紫、蘭、綠、褐、黑等不同色素，若是水溶性的色素，還可透入培養(yǎng)
3、基內，將培養(yǎng)基染上相應的顏色，如果是非水溶性（脂溶性）色素，則使菌落呈現相應的顏色，因此，色素是鑒定菌種的重要依據。⑵氣生菌絲：又稱二級菌絲體。營養(yǎng)菌絲體發(fā)育到一定時期，長出培養(yǎng)基外并伸向空間的菌絲為氣生菌絲。⑶孢子絲：當氣生菌絲體發(fā)育到一定程度，其上分化出可形成孢子的菌絲即孢子絲，又名產孢絲或繁殖絲。放線菌最突出的特性之一是產生大量的、種類繁多的抗生素，根據估計，全世界共發(fā)現4000多種抗生素，其中絕大部分是由放線菌產生的。2、霉菌：霉菌是一些“絲狀真菌”的統稱，不是分類學上的名詞。凡是在基質上長成毛狀、棉絮狀或蜘蛛網狀的絲狀真菌統稱霉菌。霉菌
4、形態(tài)比細菌、放線菌復雜，個體比較大，具有分枝的菌絲體和分化的繁殖器官。因此，在觀察是要注意菌絲的直徑大小，菌絲體有無隔膜，營養(yǎng)菌絲有無假根，無性繁殖或有性繁殖時形成的孢子是哪一種，孢子是怎樣著生的。由于霉菌的菌絲較粗大，而且孢子容易飛散，如將菌體置于水中容易變形，故觀察時狀不用水浸法制片，而將菌體置于乳酸石炭酸棉蘭染液中，使細胞不易干燥，并有殺菌作用。根霉三、實驗材料放線菌和真菌培養(yǎng)物1.放線菌培養(yǎng)物：鏈霉菌四天插片培養(yǎng)物。2.黑曲霉培養(yǎng)物。3.各種真菌示范片。顯微鏡、載玻片、接種環(huán)、解剖針、解剖刀、酒精燈、鑷子等。乳酸石炭酸棉蘭染液、碘液、酒精
5、、蒸餾水等四、實驗步驟觀察放線菌氣生菌絲和基內菌絲的區(qū)別取插片一片，直接在顯微鏡下進行觀察，注意分界面兩側菌絲形態(tài)的差異插片法培養(yǎng)放線菌2、霉菌：在載玻片上滴加一滴乳酸石炭酸棉蘭→用解剖針取少許霉菌于染色液中→挑開菌絲→蓋上蓋玻片片→鏡檢。觀察黑曲霉菌絲分隔情況和分生孢子著生情況（著重辨認分生孢子梗、足細胞和分生孢子）：觀察根霉菌絲情況和子囊孢子情況（著重辨認孢子囊、包囊梗、假根）：五、實驗結果記錄所觀察到的放線菌基內菌絲和氣生菌絲的差別繪制青霉（40x）、黑曲霉（40x）的形態(tài)，注明各部分名稱。1.為何要用乳酸石炭酸棉蘭染液對霉菌進行染色?實驗
6、(二)、從土壤中稀釋分離微生物一、實驗目的：學習微生物稀釋平板計數及劃線分離技術二、實驗原理:采用適宜(選擇)培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件，或加入某種抑制劑有利于目標微生物的生長，從而分離獲得目標微生物的純培養(yǎng)：常用稀釋平板分離法和劃線分離法在固體培養(yǎng)基上形成單個菌落依據一個單細胞在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)后可以長成一菌落從而推算樣品中含有多少細菌或真菌的活菌數目從土壤中稀釋分離微生物的方法如下：（一）土壤懸液制備準備1瓶土壤懸液：稱10克土壤放入帶玻璃珠的90ml瓶裝無菌水中，手搖振蕩(10-20min)，使土樣分散。三、實驗步驟：（二）懸液稀釋：方法見下圖：（三
7、）倒固體瓊脂培養(yǎng)基平板：分離細菌的同學取一瓶牛肉膏培養(yǎng)基（200ml／瓶）熔化后加制霉菌素1ml后倒平板。分離真菌的同學取一瓶馬丁-孟加拉紅培養(yǎng)基（200ml／瓶）熔化后冷至50℃后加鏈霉素2ml倒平板。（四）懸液涂布(演示):無菌操作(從稀至濃將菌液涂布均勻)采用10－2，10－3，10－4稀釋液涂布馬丁－孟加拉紅平板；采用10－3，10－4，10－5稀釋液涂布牛肉膏蛋白胨平板,每人用剩下的1個平板做劃線分離，從三角瓶中取土壤懸液作劃線分離（演示）（五）培養(yǎng)：每個同學把平板用報紙包好（每個平板方向一致），寫上班級和姓名，皿底朝上，置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)
8、(溫度?!)。（六）檢查結果平板涂布簡單易行，但易造成機械損傷劃線分離方式結果分析:1.我所涂平板種類：（牛肉膏或馬丁氏）2.計數：牛肉
