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1、手性藥物 分離分析技術(shù)概況李文靜手性藥物概念手性藥物是光學(xué)純的化學(xué)物質(zhì)。光學(xué)純物質(zhì)因為能使平面偏振光旋轉(zhuǎn)一定角度，所以也稱為旋光性物質(zhì)。一對對映體中如果使平面偏振光左旋轉(zhuǎn)，就稱為左旋物質(zhì)。反之則稱為右旋物質(zhì)。如果這對旋光異構(gòu)體等量混合，則不產(chǎn)生旋光，稱為外消旋。用光學(xué)純的化學(xué)物質(zhì)作為藥物則稱為手性藥物。自然界存在各種各樣的手性現(xiàn)象。在機體的代謝和調(diào)控過程中所涉及的物質(zhì)，比如蛋白質(zhì)、氨基酸、多糖、核酸、酶等重要基礎(chǔ)物質(zhì)，都是手性的，都具有極強的手性識別能力。在這樣一個手性環(huán)境中，手性藥物在生物體內(nèi)的吸收、分布、代謝和排泄均體現(xiàn)出立體選擇性，手性藥物的不同對映體間往往顯示
2、出不同的藥理學(xué)和毒理學(xué)特性以及不同的藥代動力學(xué)性質(zhì)。當(dāng)前大多數(shù)藥物是以外消旋體的形式出現(xiàn)。但在美國FDA，歐盟和日本相繼采取了相應(yīng)措施規(guī)范手性藥物市場之后，近年來單一對映體藥物市場每年以20%以上的速度增長。手性拆分成為了熱門的研究課題。手性藥物的分離分析技術(shù)為了深入探討手性藥物的兩個對映異構(gòu)體各自的生理和藥理作用及臨床應(yīng)用，對映體的拆分和測定技術(shù)的研究越來越引起人們的普遍關(guān)注。在各種分離分析技術(shù)中，現(xiàn)代色譜分離分析技術(shù)在對映體的分離與測定方面顯示出巨大的優(yōu)越性。手性藥物分離分析技術(shù)1.高效液相色譜(HPLC)2.氣相色譜(GC)3.毛細管電泳(CE)4.超臨界流體色
3、譜(SFC)5.毛細管電色譜拆分法（CEC）HPLCCMPA法直接法GSP法間接法前者直接以手性流動相(CMPA)或手性固定相(CSP)進行分離;后者是對映體混合物用手性試劑作柱前衍生,形成一對非對映體.然后以常規(guī)固定相分離,該法亦稱作手性衍生化試劑法(CDR)。CDR法是將不對稱中心引入分子內(nèi),而CMPA法和CSP法則是將不對稱中心引入分子間。CMPA法CMPA法是將手性選擇劑添加到流動相中,利用手性選擇劑與藥物消旋體中各對映體結(jié)合的穩(wěn)定常數(shù)不同,以及藥物與結(jié)合物在固定相上分配的差異,實現(xiàn)對映體的分離。優(yōu)點與不足此法的優(yōu)點在于:不需對樣品進行衍生化,可采用普通的色譜
4、柱,手性添加劑可流出,也可更換,同時添加物的可變范圍較寬。不足之處為易引起高柱壓，系統(tǒng)平衡時間較長,添加劑消耗較大常用的手性流動相添加劑目前常用的手性流動相添加劑有:環(huán)糊精(CD)及其衍生物、配位基手性選擇劑(手性配合試劑多為氨基酸及其衍生物,配位金屬多為Cu2+)、手性離子對添加劑、蛋白質(zhì)、大分子抗生素。GSP法CSP法是由擔(dān)體鍵合高光學(xué)純度的手性異構(gòu)體制作而成。在拆分中GSP直接與對映體相互作用,而其中一個生成具有不穩(wěn)定的短暫的對映體復(fù)合物,造成在色譜柱內(nèi)保留時間的不同,從而達到分離的目的。常用的手性固定項目前常用的手性固定相有:吸附型手性固定相(包括手性聚合物固
5、定相和氨基酸手性固定相)、電荷轉(zhuǎn)移型固定相(如四硝基-9-亞芴基氧化丙酸)、模擬酶手性固定相、配體交換手性固定相、蛋白質(zhì)手性固定相、冠醚類手性固定相等。CDR法CDR法是將藥物對映體先與高光學(xué)純度衍生化試劑(CDR)反應(yīng)形成非對映異構(gòu)體,再進行色譜分離測定。該法的優(yōu)點是衍生化后可用通用的非手性柱分離,而且可選擇衍生化試劑引入發(fā)色團提高檢測靈敏度。缺點是操作復(fù)雜、易消旋化;對衍生化試劑要求高;要求對映體的衍生化反應(yīng)迅速且反應(yīng)速率一致。氣相色譜(GC)氣相色譜法是較早用來進行對映體分離的一種分離色譜方法。一般地說，它速度快、簡單、靈敏，在分離對映體時，其分離度重復(fù)性和精度
6、都很高，對于可揮發(fā)的熱穩(wěn)定手性分子，它表現(xiàn)出了明顯的優(yōu)勢。GC手性固定相按照拆分機制可分為三類:一、基于氫鍵作用的手性固定相二、基于配位作用的手性金屬配合物固定相三、基于包含作用的環(huán)糊精衍生物固定相第一類主要是氨基酸衍生物固定相，這類手性固定相中含有酰胺基或羧酸酯基，可以與手性藥物分子中的活潑基團通過氫鍵作用締合，形成非對映異構(gòu)體締合物。由于立體因素和氫鍵作用的不同，所形成的非對映異構(gòu)體締合物的穩(wěn)定性也不同，導(dǎo)致對映體通過色譜柱所需時間不同而將它們分離開?；谂湮蛔饔玫氖中越饘倥浜衔锕潭ㄏ?，一般要求被分析物有二電子或孤對電子，分離機制主要基于二相互作用，可以用來拆分低
7、沸點手性化合物如烯、醇、醚、酮以及昆蟲信息素和香精油等?；诎饔玫沫h(huán)糊精衍生物固定相在GC手性分離研究中發(fā)展最快，其選擇性高，應(yīng)用也廣。一般認為環(huán)糊精固定相的拆分機制是由于環(huán)糊精特殊的籠狀結(jié)構(gòu)，可與對映體形成非對映的包含物而達到拆分的目的。盡管氣相色譜是開發(fā)得較早的一種分離對映體的色譜手段，但它存在著一些固有的局限性，如要求分析樣品具有一定的揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性。一般說來，氣相色譜要實現(xiàn)制備比較困難。毛細管電泳手性分離(CE)毛細管電泳手性分離是20世紀80年代以來新興的一種分離技術(shù)，這項技術(shù)為極性大、熱穩(wěn)定性差和揮發(fā)性手性藥物的拆分提供了經(jīng)濟有效的
