毛細管電色譜.ppt

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1、CapillaryElectrochromatography毛細管電色譜（CEC）CEC發(fā)展進程1952年Mould和Synge首次在色譜分析上使用了電滲流，他們在薄層色譜上利用電場分離了膠棉中的多糖化合物。1974年P(guān)retorius才首次成功地實現(xiàn)了在填充毛細管液相色譜中用電滲流取代泵，并獲得了比傳統(tǒng)液相色譜高的柱效能，但是由于Pretorius當時所用的柱子管徑較大，因此CEC的優(yōu)越性沒有得到充分展示，所以在70年代后期，此法沒有得到充分重視。直到1980年Otsuka才又發(fā)表了一篇有關(guān)CEC的文章。1981年

2、Jorgenson等用CEC分離了兩種毛細管區(qū)帶電泳難以分離的電中性芳香化合物后，逐漸引起人們的重視，關(guān)于CEC的文章陸續(xù)得到了報道。1987年特別是在Knox從理論上闡述了CEC高效性的特點以后，毛細管電色譜才真正的得到了飛速發(fā)展并成為一個新的研究方向。毛細管電色譜（CEC）是在毛細管中填充或在毛細管壁涂布、鍵合色譜固定相，依靠電滲流（或電滲流與壓力流結(jié)合）推動流動相，使溶質(zhì)分子依據(jù)它們在固定相和流動相中的分配平衡常數(shù)不同和電泳速度不同而達到分離目的的一種電分離模式.也定義為：一種溶質(zhì)與固定相間的相互作用占主導(dǎo)地位的

3、電泳過程。CEC基本原理1、微型分離技術(shù)2、micro-HPLC和CE的結(jié)合3、電滲流(EOF)為流動向的推動力4、二維分離機理：液相色譜和電泳之和（分配和電泳淌度）CEC與HPLC原理的比較：CEC：是采用具有塞狀流型的電滲流推動流動相，其線速度是與柱的直徑和填料顆粒大小無關(guān)的。因而在毛細管中幾乎沒有流速梯度，譜帶展寬效應(yīng)很小。HPLC：是采用壓力驅(qū)動流動相，流速隨填料顆粒大小和柱長而變化，流速在管中呈拋物線狀輪廓，因而造成譜帶展寬和柱效的降低。HPLC和CEC的柱效比較粒徑（?m）HPLCCEC柱長(cm)塔板數(shù)柱

4、長(cm)塔板數(shù)55045,0005090,00033050,00050150,0001.51533,00050210,000CEC的操作模式用電滲流驅(qū)動的電色譜由于儀器結(jié)構(gòu)簡單，應(yīng)用面比較廣。用電滲流和泵雙重驅(qū)動的電色譜優(yōu)點：避免在分離過程中氣泡的產(chǎn)生，同時可以用泵來控制流速，縮短分離時間。電滲流的特性CEC結(jié)合了色譜和電泳的優(yōu)點：?分離范圍廣（可分離中性及離子化的化合物）；?分辨率高：由于柱內(nèi)無壓降，可以使用小粒度固定相及長柱子；?柱效高；?具有HPLC的多種選擇性。CEC的缺點1、在傳統(tǒng)的CEC模式中，由于焦耳熱

5、效應(yīng)，常常會遇到氣泡和“柱內(nèi)干涸”等問題；2、氣泡的出現(xiàn)會導(dǎo)致基線不穩(wěn)、重現(xiàn)性不好、電滲流的中斷等現(xiàn)象；3、在傳統(tǒng)的CEC系統(tǒng)中加入一個u-HPLC泵，依靠電滲流結(jié)合壓力流的模式來驅(qū)動流動相的一種新技術(shù)，就是熟悉的加壓毛細管電色譜（pressurizedcapillaryelectrochromatography，簡稱pCEC)pCEC(1)改變泵壓可有效地調(diào)節(jié)樣品中各組分的保留，提高分離度；(2)有效地縮短樣品的分析時間；(3)減少流動相和毛細管中(4)易于實現(xiàn)梯度洗脫；pCEC研究的熱點：CEC理論的研究；儀器聯(lián)用

6、技術(shù)的發(fā)展；梯度洗脫技術(shù)；毛細管柱的制備（填充柱或整體柱）；芯片技術(shù)；應(yīng)用領(lǐng)域拓展（環(huán)境分析，食品分析，生化分析等）；CEC研究熱點和難點熱點：電色譜理論的研究和完善柱制備技術(shù)的研發(fā)填充式、開管式和整體柱式應(yīng)用領(lǐng)域的拓寬環(huán)境領(lǐng)域、醫(yī)藥和生化領(lǐng)域手性拆分難點：柱制備技術(shù)焦耳熱效應(yīng)塞子效應(yīng)氣泡問題BasicinstrumentationofCEC儀器主要包括四個模塊：流體輸送單元（SolventDeliveryModule）；微流控制單元（MicroFlowControlModule）；高壓電源（HighVoltageMo

7、dule）；檢測器（DetectionModule）和數(shù)據(jù)采集軟件。各部分分別開關(guān)、設(shè)置工作參數(shù)和程序。使用溫度10-35℃，相對濕度不大于75%。可以進行毛細管微柱色譜、毛細管電色譜、加壓毛細管電色譜、毛細管電泳分析。TriSepTM-2100加壓毛細管電色譜儀操作流程準備工作：樣品：過濾（0.45或0.22μm濾膜）流動相：過濾（0.45或0.22μm濾膜），脫氣,(注意：超聲脫氣時，水太熱了要換)各單元參數(shù)設(shè)置及操作1．溶劑輸送單元1．1參數(shù)設(shè)置：反復(fù)按FUNC/BACK鍵至顯示所要設(shè)置的參數(shù)，按數(shù)字鍵輸入后，E

8、NTER確認；設(shè)置下一參數(shù)，主要參數(shù)設(shè)置完成，按CE回到初始畫面。常用參數(shù)包括流速FLOW（正常流速為0.02-0.05mL/min,如果在這個流速范圍內(nèi)進樣量太大，就增加流速；反之就減小流速）、最高、最低限壓P.MAX/P.MIN等（最低限壓建議設(shè)置大于0的數(shù)值，否則漏夜、進氣保護功能不能發(fā)揮作用）1．2．3編輯梯度送液程序：在