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《銅綠假單胞菌的分類鑒定.ppt》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、銅綠假單胞菌的分離及鑒定組員：張沖郭澤王平銅綠假單胞菌實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私忏~綠假單胞菌的微生物學(xué)特性掌握微生物實(shí)驗(yàn)技術(shù)基本原理及操作熟悉銅綠假單胞菌的分離鑒定程序及方法概述銅綠假單胞菌慣稱綠膿桿菌，為革蘭氏陰性桿菌，屬假單胞菌屬。它在自然界分布甚廣，空氣、水、土壤中均有存在，在潮濕處可長期生存，對(duì)外環(huán)境的抵抗力比其他菌強(qiáng)，抗干燥的能力也強(qiáng)。生物學(xué)特性形態(tài)：革蘭氏陰性桿菌，菌體長短不一；單端單鞭毛；動(dòng)力陽性；無芽胞。特性：專性需氧；生長溫度范圍是25℃~42℃，最適生長溫度35℃，4℃不生長。生物學(xué)特性抗原性:O抗原H抗原粘液抗原R抗原菌毛抗原產(chǎn)生熒光素和水溶性的綠膿素，培養(yǎng)物呈藍(lán)
2、綠色。生物學(xué)特性在血平板上形成大而扁平、濕潤、有金屬光澤、藍(lán)綠色、透明溶血環(huán)菌落，有生姜味；在普通平板、血平板、麥康凱平板上可形成5種不同形態(tài)的菌落典型型粘液型侏儒型粗糙型大腸菌樣型生物學(xué)特性菌落呈灰綠色，大小不一,扁平濕潤，邊緣不規(guī)則呈傘狀伸展，表面?？梢娊饘俟鉂伞５湫托停溈祫P平板）生物學(xué)特性產(chǎn)綠膿素瓊脂染成黃綠色典型型（普通平板）生物學(xué)特性菌落光滑凸起成粘液狀粘液型（血平板）粘液型（麥康凱平板）生物學(xué)特性菌落中央凸起邊緣扁平表面粗糙粗糙型（麥康凱平板）生物學(xué)特性菌落圓形凸起似大腸埃希菌菌落大腸型（麥康凱平板）細(xì)小，無光澤半透明菌落侏儒型（麥康凱平板）生化特性氧化酶：
3、+葡萄糖的氧化（O/F）：O枸櫞酸鹽利用：+精氨酸雙水解：+明膠液化：+硝酸鹽還原：+乙酰胺酶：+吲哚試驗(yàn)：-微生物學(xué)檢驗(yàn)?zāi)撘禾的蛞旱戎苯油科?、革蘭染色、鏡檢分離培養(yǎng)（血平板、麥康凱）18-24h35℃可疑菌落（金屬光澤、β-溶血、產(chǎn)綠色素、特殊氣味）初步鑒定最終鑒定色素鑒定生化反應(yīng)42℃生長分型（血清學(xué)噬菌體）革蘭陰性桿菌，氧化酶陽性菌落特征氣味綠膿素報(bào)告檢驗(yàn)程序藥敏試驗(yàn)試驗(yàn)材料病料：痰液標(biāo)本試劑：氧化酶紙片，明膠、革蘭染色液、藥敏紙片、無菌生理鹽水及生化管配套試劑等培養(yǎng)基：普通平板、血平板、麥康凱平板、半固體培養(yǎng)基、非發(fā)酵菌微量生化管等其它：顯微鏡、培養(yǎng)箱、小試管、載
4、玻片、接種針、接種環(huán)、酒精燈、火柴、平皿等分離培養(yǎng)標(biāo)本采集：膿液、濃痰（無菌拭子）痰液標(biāo)本的前處理加入等量的PH7.6的1%胰酶溶液，放置35℃、90min使痰液均質(zhì)化。直接涂片，革蘭氏染色，鏡檢分別接種普通平板、血平板和麥康凱平板，培養(yǎng)18—24h，進(jìn)一步進(jìn)行鑒定。初步鑒定選出可疑菌落金屬光澤、β-溶血、產(chǎn)綠色素、特殊氣味等初步鑒定染色鏡檢：取可疑菌落，進(jìn)行革蘭氏染色、鏡檢。氧化酶試驗(yàn)：挑取可疑菌落于濾紙片上，滴加一滴新配制的5%二甲基對(duì)苯二胺試劑，15-30min內(nèi)，出現(xiàn)紅色至紫紅色，為陽性；若不變色，為陰性。綠膿菌素試驗(yàn)：選取可疑菌落2-3個(gè)，置于綠膿菌素測(cè)定用培養(yǎng)
5、基，于37℃培養(yǎng)24h，加入氯仿、色素后，再加入鹽酸，上層稀鹽酸液內(nèi)出現(xiàn)紅色為陽性，表示菌落中含有綠膿菌素。初步鑒定最終鑒定明膠液化試驗(yàn)：選取可疑菌落的純培養(yǎng)物，穿刺接種于明膠培養(yǎng)基內(nèi)，37℃培養(yǎng)24h，取出后放入冰箱10-30min，如若溶解，即試驗(yàn)呈陽性；如凝固不溶，試驗(yàn)呈陰性。硝酸鹽還原試驗(yàn)：選取可疑菌落的純培養(yǎng)物，接種于硝酸鹽培養(yǎng)基，置于37℃培養(yǎng)24h，如若培養(yǎng)基中的小倒管內(nèi)有氣體，試驗(yàn)呈陽性。最終鑒定吲哚試驗(yàn)：選取可疑菌落的純培養(yǎng)物接種于蛋白胨水，培養(yǎng)8h-24h后，加Kovacs（靛基質(zhì)）試劑約3mm高，如若在液層界面發(fā)生紅色，即為陽性反應(yīng)。42℃生長試驗(yàn)：
6、選取純被檢物，接種于普通瓊脂斜面培養(yǎng)基上，于42℃培養(yǎng)4h，銅綠假單胞菌能生長為陽性反應(yīng)。血清學(xué)鑒定血清群鑒定：取潔凈玻片，滴加多價(jià)O血清于玻片，再接種此菌的純培養(yǎng)物少許混勻，2min觀察凝集現(xiàn)象，鑒定。血清學(xué)分型：按血清分型試劑盒操作說明進(jìn)行操作：將待檢測(cè)菌在LB瓊脂培養(yǎng)基中過夜培養(yǎng)，取少許與30μL陽性血清混合，一分鐘觀察結(jié)果。判定標(biāo)準(zhǔn)：有凝集塊出現(xiàn)，且生理鹽水空白對(duì)照組不凝集者為陽性。藥敏試驗(yàn)擴(kuò)散法（K-B法）選用抗菌藥物，對(duì)分離的細(xì)菌進(jìn)行敏感性試驗(yàn)：藥敏片：慶大霉素、環(huán)丙沙星、頭孢噻肟、鏈霉素、恩諾沙星、諾氟沙星、頭孢哌酮、青霉素；根據(jù)抑菌圈的大小判斷病原菌對(duì)藥物
7、的敏感程度。請(qǐng)老師批評(píng)指正！
