擬南芥低鈣誘導(dǎo)cDNA文庫的構(gòu)建.pdf

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1、北方農(nóng)業(yè)學(xué)報2016，４4（5）：8～14JOURNALOFNORTHERNAGRICULTUREdoi:10.3969/j.issn.2096-1197.2016.05.02擬南芥低鈣誘導(dǎo)cDNA文庫的構(gòu)建高天１，鐵英2，王妍1，祁智1（1.內(nèi)蒙古大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，內(nèi)蒙古呼和浩特010021；2.內(nèi)蒙古和盛生態(tài)科技研究院有限公司，內(nèi)蒙古呼和浩特010021）摘要：鈣是植物生長發(fā)育所必需的營養(yǎng)元素，Ca2+作為細胞內(nèi)信使參與多種信號途徑。為了進一步研究Ca2+在植物體內(nèi)的調(diào)控機制，以生態(tài)型擬南芥為

2、材料，提取了擬南芥經(jīng)低鈣誘導(dǎo)處理的幼苗總RNA，使用SMARTcDNA合成技術(shù)合成含有與pGADT7-Rec載體末端同源的cDNA，然后將cDNA和pGADT7-Rec共轉(zhuǎn)入酵母菌株Y187中，通過同源重組構(gòu)建了擬南芥低鈣誘導(dǎo)的cDNA文庫。經(jīng)檢測，文庫滴度為3×109cfu/mL，文庫插入片段在200~2700bp，平均插入片段大小為760bp，陽性克隆率為79.2%。結(jié)果表明此cDNA文庫質(zhì)量良好，適用于互作蛋白的篩選。關(guān)鍵詞：擬南芥；Ca2+；cDNA文庫中圖分類號：Q943.2文獻標(biāo)識碼：

3、A文章編號：2096-1197（2016）０5－０００8－０72+ConstructionofcDNAlibraryinducedbylowCainArabidopsisthalianaGAOTian1，ＴIEＹｉｎｇ2，WANGYan1，QIZhi1（１.CollegeofLifeScience，InnerMongoliaUniversity，Hohhot010021，China；2.InnerMongoliaHeshengEcologicalScienceandTechnologyResear

4、chInstituteCompanyLimited，Hohhot010021，China）2+Abstract：Calciumisanindispensablenutrientelementforplantgrowthanddevelopment.Thecalciumion（Ca）isaversatileintracellularmessengerthatisinvolvedinnumeroussignallingpathways.Inordertoexploretheregulatorymech

5、anismofcalciumhomeostasisinplants，weisolatedtotalRNAfromArabidopsisthalianaseedlingsinducedwithlowCa2+.First，SMARTcDNAsynthesistechnologywasusedtocreateacDNApoolwithendsequenceshomologoustothepreyvectorpGADT7-Rec.Thenweco-transformedY187YeastStrainand

6、allowedtheyeasttoperformarecombinationstepbetweenthelinearpreyvectorandthecDNA.ThecDNAlibraryinducedbylowCa2+inArabidopsisthalianawasthusconstructed.Thelibrarycapacityisabout3×109cfu/mL.Thelengthoftheinsertionfragmentsrangesfrom200to2700bpwithanaverag

7、elengthof760bpandthepositiveclonerateis79.2%.ThesedatasuggestthatthecDNAlibraryisinhighqualityandsuitableforscreeningtheinteractingproteinsinArabidopsisthaliana.Keywords2+；cDNAlibrary：Arabidopsisthaliana；Ca擬南芥為十字花科植物，廣泛分布于歐亞大陸擬南芥植株較小，在有限的空間內(nèi)可大量種植；結(jié)實和非

8、洲西北部。擬南芥作為一種模式植物，具有其他多（每株植物可產(chǎn)生數(shù)千粒種子）；遺傳轉(zhuǎn)化操作簡植物無法替代的優(yōu)點：生長周期短（從發(fā)芽到開花單，易獲得突變體；自花授粉植物，基因高度純合；基28～42d）；基因組?。s為12500萬堿基對，包含約于上述優(yōu)點，擬南芥成為植物分子遺傳學(xué)研究的模2.6萬個基因，編碼約2.5萬種蛋白質(zhì)），基因組僅由式材料，被科學(xué)家譽為“植物中的果蠅”，廣泛用于植物生命奧秘的研究探索[1-3]5對染色體組成，是目前已知植物基因組中最小的；。收稿日期：2016-08-1