RNA干擾沉默Ghrelin基因?qū)ψ胸i胃酸分泌的調(diào)節(jié)作用.pdf

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1、南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)JournalofSouthernAgriculture2016,47(8):1396—1400ISSN2095—1191;CODENNNXAABDOI:10.39696:issn.2095-1191.2016.08.1396RNA干擾沉默Ghrelin基因?qū)ψ胸i胃酸分泌的調(diào)節(jié)作用杜改梅1,胡志華1,羅碧平·,吳結(jié)革1,張淼1,晏文梅1,劉茂軍2+(1金陵科技學(xué)院動(dòng)物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院,江蘇金陵210038;2江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院獸醫(yī)研究所/農(nóng)業(yè)部獸用生物制品工程技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/國(guó)家獸用生物制品工程技術(shù)研究中心,南京210014)摘要:【目的】研究生長(zhǎng)素(Ghrelin)基因沉默對(duì)仔豬

2、胃酸分泌的調(diào)節(jié)作用,為防治仔豬斷奶后某些消化系統(tǒng)功能障礙或分泌異常研究提供新靶點(diǎn),進(jìn)而闡明Ghrelin對(duì)胃酸分泌的調(diào)節(jié)作用機(jī)制?!痉椒ā坎捎弥|(zhì)體將RNA干擾沉默的shGhrelin轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的豬胃黏膜上皮細(xì)胞,優(yōu)化確立最佳轉(zhuǎn)染條件,并通過熒光定量RT—PCR檢測(cè)shGrelin轉(zhuǎn)染對(duì)胃黏膜上皮細(xì)胞中Ghrelin基因mRNA表達(dá)及H+-K+-ATPase(質(zhì)子泵)活性的影響?!窘Y(jié)果】質(zhì)粒(shGhrelin)與脂質(zhì)體(Lipofectamine2000)的最佳轉(zhuǎn)染比例為1:3,最佳轉(zhuǎn)染時(shí)間24h。與正常對(duì)照組相比,以shGhrelin轉(zhuǎn)染胃黏膜上皮細(xì)胞后,其Ghrelin基因mRNA

3、的表達(dá)顯著降低(P

4、,HUZhi-hual,LUOBi-ping1,WUJie-gel,ZHANGMia01,YANWen-mei1,LIUMao-jun2+(tDepartmentofAnimalScienceandTechnology,JinlingTechnologyInstitution,Jinling,Jiangsu210038,China;2InstituteofVeterinaryMedicine,JiangsuAcademyofAgricuhuralSciences/KeyLaboratoryofAnimalDiseasesDiagnosticandImmunology,MinistryofA

5、gricuhure/NationalCenterforEn百neeringResearchofVeterinaryBioproduets,Nanjing210014,China)Abstract:【Objecfive]TheregulatingeffectofGhrelingenesilencingongastricacidsecretionwereinvestigated,inordertoprovidenewtargetfordigestivesystemdysfunctionsordiacrisisofweaningpiglet,andthenclarifyregulationmec

6、hanismofghrelininthegastricacidsecretion.【Method】shGhrelinwastransfectedintoinvitroporcinegastricmucosalcellsusingliposome,andthetransfeetionconditionswerefurtheroptimized.TheeffectsofshGhrelintransfectiononGhre—lingenemRNAexpressionandH+-K+一ATPase(protonpump)activityweredetectedbyfluorescentquant

7、itativeRT—PCR.【ResultlTheresultsshowedthat,theoptimaltransfeetionratioofplasmid(shGhrelin)tolipofectamine2000was1:3,andtheoptimaltransfectiontimewas24h.Furthermore.a(chǎn)ftershGhrelinwastransfectedintoinvitroporcinega

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