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1、第一部分微生物培養(yǎng)技術(shù)實驗一培養(yǎng)基(medium,media,culturemedia)的制備1實驗一培養(yǎng)基的制備技術(shù)1.前期準(zhǔn)備:1)確定和選擇配方-MSM;LB細(xì)菌—真菌—放線菌—2實驗一培養(yǎng)基的制備技術(shù)培養(yǎng)基(medium,media,culturemedia)的制備1.前期準(zhǔn)備:2)準(zhǔn)備試劑,器皿和設(shè)備等;①常用試劑等材料:基本試劑:牛肉膏;蛋白胨;瓊脂;NaCl;pH試紙;HCl和NaCl調(diào)整pH使用商品化干燥培養(yǎng)基:營養(yǎng)瓊脂,細(xì)菌培養(yǎng)基等②玻璃器皿等試管;錐瓶;燒杯;培養(yǎng)皿;量筒;玻棒;漏斗;鐵支架;自制棉塞(紗布,棉花,線);角
2、匙;標(biāo)簽紙或者記號筆;牛皮紙(或者報紙);鍋(配置培養(yǎng)基,處理污染物等);火柴(打火機);接種環(huán);③儀器等天平;電爐(電磁爐);高壓蒸汽滅菌器(鍋);電烘箱(干熱滅菌箱);培養(yǎng)箱(后期培養(yǎng)時使用);恒溫水浴箱(培養(yǎng)基恒溫)等;3實驗一培養(yǎng)基的制備技術(shù)2.基本流程(1)自行配置培養(yǎng)基按照配方稱取藥品↓調(diào)pHpH7.2-7.4;用NaOH↓分裝按照規(guī)定量裝入容器,例如試管,三角瓶,加棉塞(自己做)↓包扎牛皮紙(報紙等),線繩,橡皮筋等↓滅菌↓分裝到培養(yǎng)皿、試管、小三角瓶↓擺斜面(試管)↓無菌檢查/存放備用4實驗一培養(yǎng)基的制備技術(shù)3滅菌1)高壓蒸汽
3、滅菌器(鍋);適用范圍:配置的培養(yǎng)基,制備無菌水等的滅菌;使用條件:恒溫121.3℃,維持20min;注意事項:高壓容器注意安全操作;開始檢查水位和密封圈;升至100℃,關(guān)掉出氣閥門。5實驗一培養(yǎng)基的制備技術(shù)3滅菌2)干熱滅菌(電烘箱);適用范圍;玻璃器皿耐熱物體的滅菌;使用條件:恒溫160℃,維持2hr;恒溫170℃,維持1hr注意事項:高溫設(shè)備,注意安全操作;6實驗一培養(yǎng)基的制備技術(shù)4分裝倒平板過程:制備固體培養(yǎng)基;培養(yǎng)基冷卻到約50℃倒平板持皿法:疊皿法:7實驗一培養(yǎng)基的制備技術(shù)4分裝液體培養(yǎng)分裝過程:制備培養(yǎng)基;培養(yǎng)基冷卻到約50℃分
4、裝到小三角瓶8第一部分微生物培養(yǎng)技術(shù)實驗二接種和培養(yǎng)(inoculationandcultivation)9試驗前液體接種液培養(yǎng):3個菌種,每種1瓶,1瓶3菌種種混合。每組一瓶;(共4個組,每組5個人)培養(yǎng)基準(zhǔn)備:MSM培養(yǎng)基。每人2個培養(yǎng)皿(固體培養(yǎng)),2個三角瓶(液培)(上個實驗已經(jīng)準(zhǔn)備好的)具體工作:給液體和固體培養(yǎng)基接種每天測定—鏡檢,OD值測定產(chǎn)出:菌種生長曲線(細(xì)菌個數(shù),OD值)10實驗二接種和培養(yǎng)1、平板培養(yǎng)接種1)平板劃線(streakplate);使用材料和用具:培養(yǎng)皿、酒精燈、接種環(huán)等:11實驗二接種和培養(yǎng)2)稀釋涂布平板
5、法(spreadplate):使用材料和用具:培養(yǎng)皿、酒精燈、涂布器(玻棒制作)等:12實驗二接種和培養(yǎng)3)倒平板法用于菌濃度稀釋的方法之一13實驗二接種和培養(yǎng)2、液體培養(yǎng)接種1)菌塊接種從平板培養(yǎng)中切下菌斑,放入三角瓶中2)孢子懸浮液接種14實驗二接種和培養(yǎng)3、培養(yǎng)方法---impossibleisnothing.試管(斜面)-靜至于冰箱;用于菌種保存培養(yǎng)皿(平板)-靜至于一定溫度;15實驗二接種和培養(yǎng)3、培養(yǎng)方法---impossibleisnothing.錐瓶(液體培養(yǎng)基)-震蕩,一定溫度;16