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《庚型肝炎病毒E2區(qū)cDNA在畢赤酵母中的表達及抗原性鑒定.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、!"卷#期生物工程學(xué)報&’()!"*’)##$$#年%月!"#$%&%’()*$+,(-.#(/%0"$(,(12+,-./#$$#!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!庚型肝炎病毒!"區(qū)#$%&在畢赤酵母中的表達及抗原性鑒定王卓華葉凱徐洪馬輝文"（武漢大學(xué)藥學(xué)院生物技術(shù)藥學(xué)系武漢1%$$5#）童立恒彭習(xí)亮（武漢市生物技術(shù)研究開發(fā)中心武漢1%$$%$）摘要利用ABC技術(shù)，從含有庚型肝炎病毒（DE&0BFGD&）包膜
2、蛋白9#.H*I（JJ8KL）的質(zhì)粒LD9M09#中，擴增得到能夠編碼日本血吸蟲谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶（DN2）和DE&0BFGD&包膜蛋白9#的融合基因片段。將此長度為!%#1KL的H*I片段插入到酵母表達載體LAOB8P中，使之位于!0因子信號肽下游，且與之同框。通過電激轉(zhuǎn)化將構(gòu)建的重組表達質(zhì)粒LAOB8P0DN209#插入到3#0"#+4+&/(*#&DN!!J菌株染色體中。篩選G;QRQ表型的轉(zhuǎn)化子，震蕩培養(yǎng)，用+>S$TJU甲醇誘導(dǎo)表達J?后，在培養(yǎng)液中得到表達的DN209#融合蛋白。經(jīng)過表達條件
3、的優(yōu)化，DN209#蛋白可占培養(yǎng)液中總蛋白的J$U。通過谷胱甘肽親和層析柱純化，DN209#融合蛋白的純度可達8JU左右。以庚型肝炎病人血清為探針，進行免疫印跡及9VONI實驗，結(jié)果表明該融合蛋白具有能被庚型肝炎病人血清特異性識別的抗原性。關(guān)鍵詞庚型肝炎病毒，9#膜蛋白，巴斯德畢赤氏酵母，表達，抗原性中圖分類號W5"文獻標(biāo)識碼I文章編號!$$$0%$4（!#$$#）$#0$!"50$4［5，"］庚型肝炎是近年來發(fā)現(xiàn)的經(jīng)血液、體液傳染的操作簡單，價格低廉等優(yōu)點。因而，巴斯德畢赤一種新型病毒性肝炎。其病原
4、體是以單股正鏈?zhǔn)辖湍笧楸磉_具有天然抗原性的重組GD&9#蛋白C*I為遺傳物質(zhì)的黃病毒科病毒DE&0BFGD&（即庚提供了一個良好的真核表達環(huán)境。型肝炎病毒）。其基因組全長8T!X8T1YK，有一個大本項研究將一段含有GD&9#區(qū).H*I片段的的開放閱讀框，能編碼約#8$$個氨基酸殘基組成的DN2融合蛋白基因插入巴斯德畢赤氏酵母表達載體GD&多聚蛋白質(zhì)。根據(jù)其.H*I序列，該蛋白被劃LAOB8P!0因子基因的下游，構(gòu)建出能過量表達GD&分成*端的9!和9#包膜蛋白區(qū)和其后的*N!0*NJ9#0DN2融合
5、基因的重組3)4+&/(*#&。通過對表達條［!X%］J種非結(jié)構(gòu)蛋白區(qū)。件的優(yōu)化，實現(xiàn)了9#蛋白的高表達，得到能被庚型近年來，表達9#區(qū)重組蛋白、構(gòu)建免疫學(xué)診斷肝炎病人血清特異性識別的GD&9#蛋白質(zhì)。試劑一直是DE&0BFGD&免疫學(xué)診斷試劑的研究熱’材料與方法點。然而，在原核表達系統(tǒng)中雖能獲得大量表達的GD&9#蛋白，但是，由于表達的蛋白在翻譯后不能’(’質(zhì)粒，菌株和試劑被正確地折疊和糖基化等翻譯后修飾，因而所得到大腸桿菌菌株HGJ!［&)4511",+0Z!48（#"$的GD&9#蛋白免疫原性很
6、差，不能被病人血清中,+0["+!J）"&6C!5*%0I!%$6I!12*I84/"#0!［1］抗GD&抗體免疫識別。一些學(xué)者利用重組的病*%,I!］及VE#!（H9%）［"&671+,（!0O/&"J5#$6!［J，4］毒表達載體轉(zhuǎn)染昆蟲細胞、小鼠細胞進行表達，7+85$#$J,+0Z&J025基因!）］為本實驗室保存。含雖然表達的蛋白具有較好的免疫原性，但其操作繁有GD&9#區(qū).H*I片段的重組質(zhì)粒L2/;’G;QI09#［8］瑣，耗時長，成本高，而且表達量不高。由石建提供。質(zhì)粒LD9M0JM0
7、!09#為含有9#.H*I甲醇營養(yǎng)型酵母———巴斯德畢赤氏酵母的L2/;’G;QI09#.1,$078+%片段與質(zhì)粒LD9M0JM0（3#0"#+4+&/(*#&）作為一個新型的真核表達系統(tǒng)，具!的重組體。質(zhì)粒LAOB8P及3#0"#+4+&/(*#&菌株有蛋白表達量高，表達的蛋白具有天然的免疫原性，DN!!［J"#&1］購自O(shè)@;S-’]3@公司。含質(zhì)粒和不含質(zhì)收稿日期：#$$!0$"0%!，修回日期：#$$!0!#0!1。"通訊作者。23(："40#50"54"#1"5；6,7："40#50"5
8、4"#%%8；90:,;(：/<:,=)3?>).@#UU生物工程學(xué)報#U卷粒的大腸桿菌菌株，分別在!"保藏于含氨芐青霉入冰預(yù)冷的$G*A’電轉(zhuǎn)化杯中，冰浴9’BO。用)BC5素（#$$!%&’(）和不含氨芐青霉素的()平板上，每*E@K/<=電激（#9$$3電壓，*9!W電容，#$’>）周傳代#次。所有!+"#$%&’($菌株均在!"下保藏后，立即加入#’(冰冷的#’CR&(山梨醇溶液，將混于,-.平板上，每*周傳代#次?？?01兔
