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1、第41卷第6期河南科技學(xué)院學(xué)報2013年12月V01．41NO．6JournalofHenanInstituteofScienceandTechnologyDec．2013doi：10．3969~．issn．1008—7516．2013．06．002不同條件對胰蛋白酶水解酪蛋白水解度的影響于傳瑞，杜開書，吳菲，申文鵬，婁偉強(qiáng)，丁凱，李淑梅(河南科技學(xué)院，河南新鄉(xiāng)453003)摘要：研究了不同溫度和水解時間以及不同濃度的SDS對胰蛋白酶水解酪蛋白水解度的影響．結(jié)果表明：在酪蛋白濃度為4％、加酶量2500U／g、pH為7的條件下，選擇溫度為5O℃，水解時
2、間為80min，酪蛋白的水解效果較佳，水解度為7．30％；同等條件下向此體系加入適量的SDS后，使SDS終濃度為0．00128g／mL，水解度提高為l3．50％．關(guān)鍵詞：酪蛋白；胰蛋白酶；SDS；水解度中圖分類號：TS201文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號：1008—7516(2013)06—0006—03EfectofdifferentconditionsontrypsinhydrolysisofcaseinhydrolysisdegreeYuChuanrui，DuKaishu，WuFei，ShenWenpeng，LouWeiqiang，DingKai，Li
3、Shumei(HenanInstituteofScienceandTechnology，Xinxiang453003，China)Abstract：EfectsofdifferenttemperatureandtimeofhydrolysisanddifferentconcentrationsofSDStotrypsinhydrolysisofcaseinhydrolysisdegreewerestudiedinexperiment．Theresultsshowedthatthebesteffectofhydrolysisofcaseinarecon
4、ditionsofcaseinconcentration4％，theamountofenzyme2500U／g，temperature50oc，reactiontimeof80rain，thedegreeofhydrolysisis7．30％．AfterjoiningthemoderateSDSunderthesameconditions，thefinalconcentrationofSDSis0．00128g／mL．thedegreeofhydrolysiscanbeincreasedto13．50％．Keywords：casein；trypsin
5、；SDS；degI_eeofhydrolysis酪蛋白是牛乳中主要的蛋白質(zhì)，約占牛乳蛋白質(zhì)總量的80％一82％，是一種全價蛋白質(zhì)，酪蛋白能夠為生物體提供必需氨基酸，但酪蛋白堅硬、致密，極難補(bǔ)充消化吸．為此，人們通過對酪蛋白進(jìn)行水解獲得多肽類物質(zhì)，這些多肽類物質(zhì)不僅具有營養(yǎng)價值，而且使其吸收利用率大為增加，更重要的是使其具有原蛋白質(zhì)或其組成氨基酸所沒有的功能．目前，在酪蛋白水解物中發(fā)現(xiàn)許多多肽類物質(zhì)，如抗菌肽、免疫活性肽、促進(jìn)礦物離子吸收肽等．因此，確定蛋白質(zhì)合適的水解條件尤為必要．但是目前水解存在的問題是：為了追求高水解度，蛋白酶大劑量使用導(dǎo)致成本增
6、加，酶浪費(fèi)嚴(yán)重．本試驗在酶劑量和pH不變的前提下，研究了不同溫度、不同作用時間對酪蛋白水解度的影響，再通過加入SDS來提高水解度，目前尚無類似報道．1材料與方法1．1試驗材料酪蛋白的制備：取1kg的鮮牛乳，脫脂后醋酸一醋酸鈉緩沖液調(diào)至pH4．6，使酪蛋白沉淀，4000r／min離心15min后，收集沉淀，再用水洗滌酪蛋白沉淀，再次離心去掉上清液，將沉淀冷凍干燥，即得酪蛋白l71．收稿日期：2013—10—20基金項目：河南科技學(xué)院大學(xué)生創(chuàng)新實驗項目(2011CXSY36)作者簡介：于傳瑞(1990一)，男，河南濮陽人，碩士研究生．主要從事天然產(chǎn)物化學(xué)
7、研究．通信作者：李淑梅(1975一)，女，山西河曲人，碩士，副教授．主要從事天然產(chǎn)物化學(xué)研究6于傳瑞等：不同條件對胰蛋白酶水解酪蛋白水解度的影響第6期1．2化學(xué)試劑胰蛋白酶(Trypsin，上海紫一試劑廠生產(chǎn)，活力單位1：250)，20mmol／L磷酸鹽緩沖液(pH7．9)，0．5mol／L的NaOH等，其他試劑均為分析純．1．3酪蛋白的水解、璉準(zhǔn)確稱取1．0000g的酪蛋白，用25mL20mmol／L磷酸鹽緩沖液(pH7．906)溶解，4調(diào)節(jié)其2pH至O7．0，加入l0mg胰蛋白酶，置于一定溫度的水浴鍋中進(jìn)行水解，加入不同劑量的SDS混勻，經(jīng)過一定
8、反應(yīng)時間后，將反應(yīng)體系置于100oC水浴鍋中煮沸5min，使胰蛋白酶失活，反應(yīng)終止I8_9】．1．4水解度的
