不同膠原支架對髓核間充質(zhì)干細胞分化的影響.pdf

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1、中國脊柱脊髓雜志2015年第25卷第6期ChineseJournalof印ineandspinalCord，2015，Vo1．25，No．6541不同膠原支架對髓核間充質(zhì)干細胞分化的影響王瑾，陳其昕，陶軼卿，李方財(1浙江大學醫(yī)學院附屬第二醫(yī)院骨科310009浙江省杭州市；2浙江省立同德醫(yī)院骨科310009浙江省杭州市)【摘要】目的：比較不同膠原支架中髓核問充質(zhì)干細胞(NPMSCs)的細胞存活、增殖能力和分化相關基因及蛋白表達等方面的差異。方法：在體外構建I型、I／Ⅱ型混合和Ⅱ型膠原支架，觀察其顯微結構、孑L隙率及降解特性

2、。從健康雄性大鼠尾椎提取NPMSCs，分別采用細胞微球、I型膠原、I／Ⅱ型混合膠原、Ⅱ型膠原支架培養(yǎng)，其中細胞微球作為對照。通過乳酸脫氫酶(LDH)檢測材料生物毒性，CCK一8測定細胞增殖，實時定量PCR和WesternBlot測定SOX9、聚集蛋白聚糖、I型膠原和Ⅱ型膠原的基因和蛋白表達水平，阿爾新藍組織學染色檢測硫酸蛋白聚糖的表達。結果：I型、I／I【型混合和Ⅱ型膠原支架孔隙率均為90％以上，構建21d后的降解率分別為(10．30~0．66)％、(9．87±o．71)％和(10．40±o．53)％。培養(yǎng)后7d細胞LDH

3、檢測結果I型、I，Ⅱ型混合和Ⅱ型膠原支架組分別為12．24~0．65、12。13~1．03、12．67~1．15，與對照組12．50~1．32比較無顯著性差異(尸>0．05)。膠原支架中培養(yǎng)5d及7d的細胞CCK一8檢測結果(I型膠原組為0．67~0．04、1．20~0．05，I／Ⅱ型混合膠原組為0．62~0．05、1．20~0．07，II型膠原組為0．69~0．02、1．34~0．04)明顯高于對照組(0．53~0．03，1．02~0．02)(P<0．05)。培養(yǎng)21d后。三種膠原支架組與對照組比較，SOX9、I型膠原、

4、Ⅱ型膠原及聚集蛋白聚糖的基因表達均顯著上升(P<0．05)，其中Ⅱ型膠原支架組上述基因表達量最高，與l型及I／Ⅱ型混合膠原支架組有顯著性差異(P<0．O5)；與對照組比較，I型膠原支架組中僅I型膠原及聚集蛋白聚糖的蛋白表達上升(P

5、論：I型膠原、I／Ⅱ型混合膠原、Ⅱ型膠原支架均促進NPMSC的分化，而Ⅱ型膠原支架促進NPMSC成髓核細胞分化作用尤為顯著。Ⅱ型膠原是髓核組織工程學的理想生物支架材料。【關鍵詞】椎間盤；髓核組織工程學；II型膠原；細胞分化doi：10．3969~．issn，1004—406X．2015．06．11中圖分類號：R318．17文獻標識碼：A文章編號：1004—406X(2015)一06—0541—08Efectofdiferenttypeofcollagenscafoldfornucleuspulposusmesenehyma

6、lstemcelldiferentiation／WANGJin，CHENQixin，TAOYiqing，etal／／ChineseJournalofSpineandSpinalCord，2015，25(6)：541-548【AbstractlObjectives：Toinvestigatethecellviability，proliferationanddifferentiation-relatedgeneandpro—teinexpressionofnucleuspulposusmesenchymalstemcells(

7、NPMSCs)indifferenttypesofcollagenscaffolds．Methods：TypeI，typeI／ⅡandtypeIIcollagenscaffoldswereformedinvitro，andmicrostructure，porosityanddegradabilityweredetected．NPMSCsisolatedfromcoccygealve~ebraofhealthymaleratswerecuhuredasmicromassorintypeIcollagen(COL—I)，typ

8、eI／11collagen(COL-I／1I)，typeIIcollagenscaffold(COL一Ⅱ)，andmicromassservedascontro1．Cytotoxicityandcellproliferationweredetectedbylactatedehydrogenase(LDH