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《大鼠腦皮質(zhì)未成熟星形膠質(zhì)細(xì)胞的分離、鑒定及原代培養(yǎng).pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、·基礎(chǔ)論著·大鼠腦皮質(zhì)未成熟星形膠質(zhì)細(xì)胞的分離、鑒定及原代培養(yǎng)吳炎宇侯博王伯丞郭英【摘要】目的探討大鼠腦皮質(zhì)未成熟星形膠質(zhì)細(xì)胞的分離、鑒定及原代培養(yǎng)技術(shù)。方法采用差速貼壁法清除成纖維細(xì)胞及酶消化去除少突膠質(zhì)細(xì)胞污染，應(yīng)用免疫熒光進(jìn)行細(xì)胞鑒定。取不同時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化，雙重免疫熒光染色觀察細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程的分化狀態(tài)。結(jié)果細(xì)胞形態(tài)觀察提示：6～14d細(xì)胞呈均勻扁平多角狀，16d后部分細(xì)胞肥大增生，呈成熟狀態(tài)。免疫組化染色顯示：GFAP(+)細(xì)胞達(dá)97％。免疫熒光雙重標(biāo)記發(fā)現(xiàn)：16d后細(xì)胞表達(dá)vimentin和nes
2、tin這兩種蛋白減弱。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)技術(shù)可獲得純度高，形態(tài)和功能良好，表達(dá)穩(wěn)定的大鼠腦皮質(zhì)未成熟星形膠細(xì)胞?！娟P(guān)鍵詞】神經(jīng)膠質(zhì)原纖維酸性蛋白質(zhì)；波形蛋白；巢蛋白；未成熟星形膠質(zhì)細(xì)胞Isolation，identificationandprimarycultureofimmatureastrocyteofratbraincortexWuYanyu,HouBo，WangBocheng,GuoYing．DepartmentofNeurosurgery,theThirdAfiliatedHospital,SunYet-sunUniversit
3、y,Guangzhou51063China，Correspondingauthor：GuoHng,Email：gdmcmn~@163．COrn【Abstract】0bjectiveToinvestigatetheisolation，identificationandprimarycultureofimmatureastrocytesofratcerebralcortex．MethodsMethodofdiferentialadherenceandtrypsindigestionwereusedtoremovefibroblasts
4、andoligodendrocytes，andidentifiedbyimmunofluorescence．Morphologywereobservedbyinvertedphasecontrastmicroscopeatdiferenttimepoints．Doubleimmunofluorescencestainingwasusedintheobservationofcellsdiferentiation．ResultsOver97％ofthecellsturnedouttobeGFAPpositive．Atday6-14，c
5、ellswasevenly,flat，homedinmorphology,andpartiallygrewmatureatday16．Immunofluorescencedoublelabelingshowedadecreaseofvimentinandnestinexpressionatday16．ConclusionThetechnologyofourexperimentiseficienttoabtainhighpurity,mo~hobgyandfunctionwell，andstableexpressionimmatur
6、eastrocytescellsfromratbraincortex．[Keywords]Glialfibrillaryacidicprotein；Vimentin；Nestin；Immatureastrocytes未成熟星形膠質(zhì)細(xì)胞作為星形膠質(zhì)細(xì)胞的前的修復(fù)，成為了當(dāng)今研究神經(jīng)修復(fù)的熱點(diǎn)[3】。然而體細(xì)胞具有定向分化成成熟星形膠質(zhì)細(xì)胞的潛能，對(duì)于如何快速獲取大量純化后的未成熟星形膠質(zhì)但相對(duì)于成熟星形膠質(zhì)細(xì)胞而言更具有可塑性。研細(xì)胞是神經(jīng)修復(fù)研究的關(guān)鍵內(nèi)容。隨著細(xì)胞學(xué)研究究表明，未成熟的星形膠質(zhì)細(xì)胞分泌一類蛋白促進(jìn)的發(fā)展，目前對(duì)于
7、未成熟星形膠質(zhì)的獲取及鑒定仍突觸的形成，提高神經(jīng)系統(tǒng)的可塑性，而成熟星形缺乏比較成熟及應(yīng)用廣泛的方法。因此建立腦皮質(zhì)膠質(zhì)細(xì)胞卻不再表達(dá)此類蛋白[1-2]o運(yùn)用未成熟星膠未成熟星形膠質(zhì)細(xì)胞的分離、純化、鑒定及原代培質(zhì)細(xì)胞移植以促進(jìn)突觸的再形成以促進(jìn)神經(jīng)損傷養(yǎng)技術(shù)成為了解細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)及對(duì)精神障礙、神經(jīng)性疾病等研究開(kāi)展的重要前提。DOI：10．3877／cma．j．issn．1674—0785．2015．11．027材料與方法基金項(xiàng)目：廣東省自然科學(xué)基金重點(diǎn)項(xiàng)目(S2012020010919)；高等學(xué)校博士學(xué)科點(diǎn)專項(xiàng)科研基金(2012
8、0171110083)；廣東省產(chǎn)學(xué)研項(xiàng)一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物目(2011B090400098)新生1d內(nèi)SD大鼠5只，雌雄不限，由中山作者單位：510630廣州，中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院神經(jīng)外科通訊作者：郭英，Email：gdmctanly@163．com大學(xué)動(dòng)
