資源描述：
《農(nóng)桿菌介導(dǎo)的大豆萌發(fā)種子轉(zhuǎn)化技術(shù)-論文.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、生物技術(shù)通報(bào)·研究報(bào)告·BloTECHNOLOGYBULLETlN2O13年第8期農(nóng)桿菌介導(dǎo)的大豆萌發(fā)種子轉(zhuǎn)化技術(shù)劉志敏熊鶴雯謝皓秦玉濤趙嫣然2郭蓓(1．北京農(nóng)學(xué)院植物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，北京102206；2．北京農(nóng)學(xué)院生物科學(xué)與工程學(xué)院，北京102206)摘要：采用農(nóng)桿茵介導(dǎo)的萌發(fā)種子侵染法，開展大豆遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)研究。以萌發(fā)大豆的生長點(diǎn)、子葉節(jié)、下胚軸3處為外植體，將帶有抗除草劑草甘膦基因EPSPS及草丁膦抗性篩選基因Bar的質(zhì)粒借助農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)入大豆中，通過共培養(yǎng)及盆栽種植獲得轉(zhuǎn)化體。經(jīng)過對(duì)T0代和T。代植株進(jìn)行雙重PCR檢測以及兩種除草
2、劑的抗性鑒定得到轉(zhuǎn)基因陽性株。試驗(yàn)結(jié)果表明，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的萌發(fā)種子轉(zhuǎn)化法已將抗兩種除草劑基因成功的轉(zhuǎn)入大豆中，其綜合轉(zhuǎn)化率約為0．37％。關(guān)鍵詞：農(nóng)桿菌萌發(fā)種子大豆遺傳轉(zhuǎn)化TheTechniqueforAgrobacterium—mediatedTransformationviaGerminatingSeedsofSoybeanLiuZhiminXiongHewenXieHaoQinYutaoZhaoYanranGuoBei‘(1．CollegeofPlantScienceandTechnology，BeijingUniversity
3、ofAgricuhure，Beijing102206；2CollegeofBiologicalScienceandEngtneering，BeijingUniversityofAgriculture，Beijing102206)Abstract：GerminationseedswereusedtoresearchthegenetictransformationtechnologyofAgrobacterium—mediatedinsoybean．Thegrowingpoint，cotyledonnodeandhypocotylofger
4、minationseedwereusedasexplants，andtheplasmidthatcarriedwiththeresistancetotheherbicideglyphosategeneEPSPSandglufosinateresistancescreeninggeneBarwastransferedtosoybeanbyAgrobacterium—mediated．TransformantswereobtainedbyCO—cultureandpottedplantgrowing．AfterthedoublePCRdet
5、ectionaswellasthetwoherbicideresistanceidentificationoftransgenieToandTlplants，thepositivestrainswereacquired．TheexperimentresultsshowedthattwogenesresistancetoherbicideshavebeensuccessfullytransferedtosoybeanviagerminatedseedsbyAgrobacterium-mediatedtransformationmethod
6、，withthetransformationrateofapproximatelyO．37％．Keywords：AgrobacteriumGerminatingseedSoybeanTransformation大豆的遺傳轉(zhuǎn)化研究因基因型依賴性強(qiáng)、構(gòu)建作為外植體進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化。其中以子葉節(jié)法和胚尖再生體系較難等原因，使其轉(zhuǎn)化率較低¨l2J。目前法被廣泛地應(yīng)用，前者獲得的植株嵌合體相對(duì)較少，大豆遺傳轉(zhuǎn)化方法主要有農(nóng)桿菌介導(dǎo)法、花粉管通但對(duì)操作技巧有一定要求，轉(zhuǎn)化率低，后期篩選工道法、子房注射法、基因槍法、真空抽濾法等，其作量較大；后者轉(zhuǎn)化率相
7、對(duì)較高，但嵌合體較多；中農(nóng)桿菌介導(dǎo)法和基因槍法應(yīng)用較多。自1983年而未成熟胚和下胚軸兩種方法由于轉(zhuǎn)化率低未得到Pederson等證明了大豆可作為農(nóng)桿菌的合適宿主廣泛的應(yīng)用。后，農(nóng)桿菌介導(dǎo)法得到了廣泛應(yīng)用，但仍存在明顯利用大豆生長點(diǎn)轉(zhuǎn)化的方法始于Chee等J，的基因型依賴性。在農(nóng)桿菌介導(dǎo)法中，可以對(duì)大豆稱為萌發(fā)種子侵染法或微注射法。這種方法是以萌的不同生長時(shí)期不同生長部位進(jìn)行侵染，比如子葉發(fā)大豆的生長點(diǎn)、子葉節(jié)、下胚軸三處為外植體，節(jié)、胚尖、未成熟胚、下胚軸、生長點(diǎn)等部位均可形成傷口后進(jìn)行農(nóng)桿菌侵染，然后種植在土壤中進(jìn)收稿日期：2013
8、-03-05基金項(xiàng)目：國家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃“863”項(xiàng)目(2012AA101106)作者簡介：劉志敏，女，碩士研究生，研究方向：大豆分子育種；E．mail：zhimin2005104@126．COB通訊作
