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1、葉綠體色素含量的測定----分光光度法中文摘要：本實驗利用菠菜葉作為原料用80%的丙酮提取葉綠體色素，應用分光光度計在某一特定波長下所測定的吸光度，帶入公式計算出色素溶液中各色素濃度。英文摘要：Inthisexperiment,weusedspinachleavesasrawmaterialandused80%ofacetonetoextractpigmentsfromthem,andapplyspectrophotometerataparticularwavelengthtodetermineabsorbanc
2、e,thentaketheabsorbanceintotheformulatocalculateconcentrationofeachpigment.實驗原理：利用80%丙酮提取葉綠體色素，葉綠素a、葉綠素b和類胡蘿卜素最大吸收峰的波長分別是663nm、646nm和470nm。根據(jù)分光光度計測定的吸光度值，可以計算出丙酮提取液中葉綠體色素含量。實驗目的：掌握分光光度法對葉綠素a、葉綠素b、葉綠素總濃度和類胡蘿卜素總濃度測定和計算的方法。實驗器材和試劑：1、材料：菠菜葉片2、用具：分光光度計、天平、研缽、漏斗、剪刀
3、、容量瓶、燒杯、濾紙、滴管等3、試劑：80%丙酮、石英砂和碳酸鈣實驗步驟：1.葉綠體色素的提取取新鮮菠菜葉片0.5克,擦干,去中脈,剪碎放入研缽;加入少許石英砂和CaCO3,再加入80%丙酮3ml,研磨成勻漿,再加80%丙酮10ml,靜置10分鐘;用漏斗濾去殘渣,用丙酮反復沖洗研缽、殘渣至無色;用容量瓶定容至50ml。2.吸光度的測定取光徑1cm比色杯，注入上述葉綠素提取液,以80%丙酮注入另一同樣的比色杯內(nèi)作為空白對照,在波長663、646和470nm下測定吸光度。3.結果計算依據(jù)下列丙酮提取液中色素濃度計算公
4、式,分別計算出葉綠素a、b的濃度及其葉綠素總濃度和類胡蘿卜素的濃度。計算公式80%丙酮提取液中色素濃度的計算Ca（葉綠素a）=12.2A663-2.81A646Cb（葉綠素b）=20.13A646-5.03A663CT（葉綠素）=Ca+Cb=17.32A646+7.18A663Cx.c（類胡蘿卜素）=(1000A470-3.27Ca-104Cb)/229葉綠體色素含量=實驗結果：波長吸光度平均值663nm0.8190.8160.8170.817646nm0.4140.4240.4210.420470nm0.828
5、0.8460.8470.840Ca（葉綠素a）=12.2×0.817-2.81×0.420=8.7872mg/LCb（葉綠素b）=20.13×0.420-5.03×0.817=4.3451mg/LCT（葉綠素）=Ca+Cb=13.1323mg/LCx.c（類胡蘿卜素）=(1000×0.840-3.27×8.7872-104×4.3451)/229=1.5693mg/LCa（葉綠素a）含量=8.7872mg/L×0.05L×1/0.5g=0.8787=87.87mg/gCb（葉綠素b）含量=4.3451mg/L×0
6、.05L×1/0.5g=0.4345=43.45mg/gCx.c（類胡蘿卜素）含量=1.5693mg/L×0.05L×1/0.5g=0.1569=15.69mg/g實驗討論：1.葉綠素a、b在藍色區(qū)也有吸收峰，能否用這一吸收峰波長進行葉綠素的定量分析？為什么？定量分析的吸收峰必須要穩(wěn)定，還要有強的吸收。另外，還需要考慮干擾的問題。光合色素除了葉綠素外還有類胡蘿卜素，類胡蘿卜素主要吸收藍光，為了排除干擾，要選用紅光。2．為什么提取葉綠素時干材料一定要用80%的丙酮，而新鮮的材料可以用無水丙酮提??？在植物缺水時，植物
7、體中的葉綠素含量會降低。干材料與新鮮材料相比水分含量較少，用無水丙酮提取不如80%丙酮下提取效果好。葉綠素的提取除了丙酮也可以用其他的提取試劑，石油醚—乙醇、乙醚—乙醇、乙醚。從菠菜葉中提取葉綠體色素時，用丙酮研磨法提取葉綠素的效率比石油醚．乙醇萃取法高，乙醚研磨法提取葉綠素的效果明顯不如丙酮，用石油醚研磨法的效果最次，這表明最佳的提取劑為丙酮，其次為石油醚一乙醇。但用混合溶劑提取的葉綠素的純度要比用單一溶劑提取的高，生產(chǎn)中可根據(jù)實際需求進行合理選用。不同有機溶劑用直接浸提法和Arnon法從菠菜葉片中提取葉綠素的
8、效率不同。有人做過此類提取實驗，結果表明,用丙酮、乙醇浸提法提取葉綠素的效率比丙酮、乙醇Arnon法高,甲醇、乙醚浸提法提取葉綠素的效果明顯不如丙酮-乙醇,而丙酮與乙醇等摩爾混合液浸提又比丙酮-乙醇液單獨浸提的效率略高。參考文獻：張素霞.菠菜葉中葉綠素提取工藝研究.中國食物與營養(yǎng)洪法水魏正貴趙貴文.菠菜葉綠素的浸提和協(xié)同萃取反應.應用化學
