血清總蛋白白測定SerumtotalproteinAlbumintest.ppt

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1、血清總蛋白、白蛋白測定（Serumtotalprotein、Albumintest）臨床生物化學(xué)：是研究機體健康和疾病的生物化學(xué)過程。測定體液或組織中的成份以提供對疾病的診斷、治療和預(yù)防。所用樣品：血液（血清/血漿）、尿液、腦脊液及體液測定方法：凱氏定氮法、雙縮脲法、酚試劑法、紫外分光光度法、染料結(jié)合法、比濁法等?？偟鞍诇y定（一）、凱氏定氮法歷史悠久，它是根據(jù)蛋白質(zhì)平均含氮量16%來計算蛋白質(zhì)濃度的。結(jié)果準(zhǔn)確，但方法復(fù)雜標(biāo)化血清檢驗其他方法（二）、雙縮脲法蛋白質(zhì)中的肽鍵

2、在堿性環(huán)境中能與銅離子作用產(chǎn)生紫紅色絡(luò)合物。此反應(yīng)和2個尿素分子縮合后生成的雙縮脲在堿性環(huán)境中與銅離子作用產(chǎn)生紫紅色絡(luò)合物的反應(yīng)相似，故稱為雙縮脲反應(yīng)。簡單、精密、準(zhǔn)確，為臨床首選的常規(guī)方法，但靈敏度稍差。（三）、酚試劑法運用蛋白質(zhì)分子中酪氨酸和色氨酸殘基能還原磷鎢酸-磷鉬酸試劑生成鉬藍(lán)來測定蛋白質(zhì)的濃度。改良法：在酚試劑中加入堿性銅離子。集中了雙縮脲法和酚試劑法的優(yōu)點靈敏度高，但受許多還原物質(zhì)的干擾，限制了它在臨床上的應(yīng)用。（四）、紫外分光光度法蛋白質(zhì)分子中的酪氨酸和色氨酸殘基在280n

3、m處有一吸收峰，可用于蛋白質(zhì)含量的測定。準(zhǔn)確性差，但因未加任何試劑和處理，可保留其生物活性且可回收全部蛋白質(zhì)，故可用于較純的酶和免疫球蛋白測定。（五）染料結(jié)合法在酸性環(huán)境下，蛋白質(zhì)分子帶正電，可與帶負(fù)電的染料結(jié)合產(chǎn)生顏色而測定之。重復(fù)性好、靈敏度高，BCG法特異性不高。（六）比濁法某些酸（如三氯醋酸、磺基水楊酸）能與蛋白質(zhì)結(jié)合產(chǎn)生微細(xì)沉淀，測定懸浮液的濁度即可求得蛋白質(zhì)的含量。簡單、試劑易得，但影響因素太多。血清總蛋白雙縮脲測定法一、原理：蛋白質(zhì)中的肽鍵（-CONH-）在堿性環(huán)境中能與銅

4、離子作用產(chǎn)生紫紅色絡(luò)合物。此反應(yīng)和2個尿素分子縮合后生成的雙縮脲（H2N-OC-NH-CO-NH2）在堿性環(huán)境中與銅離子作用產(chǎn)生紫紅色絡(luò)合物的反應(yīng)相似，故稱為雙縮脲反應(yīng)。顏色的深淺在一定濃度范圍內(nèi)與蛋白質(zhì)含量成正比，經(jīng)與同樣處理的蛋白標(biāo)準(zhǔn)液比較，即可求得蛋白質(zhì)含量郎伯-比耳定律：——溶液的吸光度與溶液濃度成正比A1=lgI0/I=K1C1L1，A2=lgI0/I=K2C2L2由于分析物質(zhì)相同，處理一樣，比色皿也相同，故A1/A2=C1/C2，則C1=×C2A1A2二、主要試劑：雙縮脲試劑（

5、NaOH、硫酸銅、酒石酸鉀鈉、碘化鉀）蛋白標(biāo)準(zhǔn)（60g/L）三、操作步驟加入物（ml）BS×2U×2血清//0.05標(biāo)準(zhǔn)液/0.05/雙縮脲試劑3.03.03.0混勻，37℃，10分鐘，540nm處比色，1cm光徑比色杯，B管調(diào)零注：1.非嚴(yán)重黃疸、脂血及高脂血癥血清不用做血清自身對照管。2.可以用蒸餾水調(diào)零，目的是檢驗各個試劑的好壞四、結(jié)果Au血清總蛋白（g/L）=——X60As五、正常參考范圍60-80g/L六、臨床意義1、總蛋白濃度升高（1）蛋白質(zhì)合成增加：大多

6、見于多發(fā)性骨髓瘤患者（2）血漿濃縮，如急性失水、外傷性休克、慢性腎上腺皮質(zhì)功能減退。2、總蛋白濃度降低（1）蛋白質(zhì)合成障礙：肝功能嚴(yán)重受損→蛋白質(zhì)合成減少（2）蛋白質(zhì)丟失增加：嚴(yán)重?zé)齻?、?出血、腎病綜合征、潰瘍性結(jié)腸炎（3）營養(yǎng)不良或消耗增加：營養(yǎng)失調(diào)、低蛋白飲食；患消耗性疾病（4）血漿稀釋：如靜脈注射過多低滲溶液或各種原因引起的水鈉潴留。七、注意事項1、黃疸血清、嚴(yán)重溶血、某些試劑（如葡萄糖、酚酞、溴磺酞鈉）對本法有明顯干擾，可用標(biāo)本空白管來消除。2、高脂血癥混

7、濁血清也會干擾比色，先用丙酮抽脂后再做。八、方法學(xué)評價準(zhǔn)確性高重復(fù)性好優(yōu)點干擾少試劑穩(wěn)定操作簡便、快速缺點靈敏度較低手工和自動化都可，已被推薦為測定血清總蛋白的參考方法。白蛋白測定白蛋白是血漿中含量最多的蛋白質(zhì)。其測定方法主要有鹽析法、電泳法、染料結(jié)合法、免疫法等。（一）、鹽析法蛋白質(zhì)分子表面因有水化膜的保護(hù)而穩(wěn)定，如果加入大量中性鹽則電荷被中和、水化膜被破壞，蛋白質(zhì)分子因相互聚積而沉淀析出，此種現(xiàn)象稱為鹽析。球蛋白分子量較白蛋白大，相等重量的表面積要小，電荷和水化膜也少，故

8、先被沉淀下來，而白蛋白仍留在溶液中，可用測定總蛋白的方法測定之。常用的中性鹽有半飽和硫酸銨、23%硫酸鈉、雙硫酸（20.8%硫酸鈉和7.0%亞硫酸鈉溶液）準(zhǔn)確性差、操作煩瑣，且不宜用自動生化分析，基本不用。（二）電泳法醋酸纖維薄膜電泳、瓊脂糖凝膠電泳。特異性高，準(zhǔn)確性不夠，操作煩瑣費時，且不宜用自動生化分析（三）染料結(jié)合法根據(jù)白蛋白結(jié)合外源性染料的能力比球蛋白大，故在不分離白、球蛋白的條件下用染料直接測定白蛋白。有干擾，但靈敏度高、操作簡便、重復(fù)性好，自動生化分析儀常用的方法。（四）免