資源描述：
《在肺尸檢標(biāo)本染色中的應(yīng)用》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、·1810·中華醫(yī)學(xué)雜志2004年11月2日第84卷第21期 NatlMedJChina,November2,2004,Vol84,No.21·臨床論著·SARS冠狀病毒單克隆抗體制備及在肺尸檢標(biāo)本染色中的應(yīng)用許慧 倪安平 盧朝輝 陳杰 【摘要】 目的 制備抗SARS冠狀病毒的單克隆抗體,用于SARS的實(shí)驗(yàn)室診斷。方法 滅活SARS冠狀病毒(PUMC01)全病毒免疫BALB/C小鼠,取小鼠脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞(NS21)融合,用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)、間接免疫熒光法(IFA)及免疫印跡法對(duì)所獲得的細(xì)胞克隆進(jìn)行篩選和鑒定,并用其中一株(M2)雜交瘤誘生的腹水單克隆抗體對(duì)SARS患
2、者尸檢肺組織切片進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色。結(jié)果 共篩選出6株雜交瘤細(xì)胞,ELISA及IFA法證實(shí)其分泌的單克隆抗體與SARS冠狀病毒有特異性反應(yīng),與其他常見呼吸道病原體均無交叉反應(yīng)。免疫雙擴(kuò)散方法鑒定1株雜交瘤細(xì)胞(M2)為免疫球蛋白IgG3型,其余5株均為IgG1型。免疫印跡試驗(yàn)顯示1株雜交瘤細(xì)胞(M2)分泌的抗體與相對(duì)分子質(zhì)量68000的蛋白有特異性反應(yīng);4株雜交瘤細(xì)胞分泌的抗體與相對(duì)分子質(zhì)量27000的蛋白有特異性反應(yīng),1株在免疫印跡上未見到結(jié)果。SARS患者尸檢肺組織病理切片免疫組織化學(xué)染色陽性,在肺泡上皮細(xì)胞、支氣管上皮細(xì)胞及巨噬細(xì)胞的胞漿均可見陽性顆粒。結(jié)論 我們制備的6株單克
3、隆抗體是抗SARS冠狀病毒的特異性單克隆抗體,用于SARS尸檢肺組織免疫組化染色,結(jié)果陽性?！娟P(guān)鍵詞】 抗體,單克隆; 核殼蛋白質(zhì)類; 冠狀病毒科PreparationofmonoclonalantibodiesagainstSARScoronavirusandstainingusageinlungautopsyspecimensXUHui,NIAn2ping,LUZhao2hui,CHENJie.DepartmentofClinicalLaboratory,PUMCHospital,CAMSandPUMC,Beijing100730,China【Abstract】ObjectiveT
4、opreparemonoclonalantibodiesagainstSARScoronavirus(SARS2CoV)onthepurposetoexplorethediagnosismethodsofSARS.MethodsFemaleBALB/CmicewereimmunizedwithdisinfectedSARS2CoV(PUMC01)andthespleencellswerefusedwithmyelomaNS21cells.Thehybridomacellstrainswerescreenedbyenzyme2linkedimmunosorbentassay(ELISA)
5、、indirectfluorescent2antibodyassay(IFA)andWesternblotting.AutopsylungtissuesectionsfromSARSpatientswerestainedwithascitesofmonoclonalantibody(M2strain)byimmunohistochemicaltechnique.ResultsSixstrainsofhybridomasthatproducedthemonoclonalantibodiesagainstSARS2CoVwereobtained.Thehybridomaswereteste
6、dtohavespecificreactionswithSARS2CoVandnocross2reactivateswithothercommonrespiratorydiseasecausingpathogens.Ofthe6strains,1wasidentifiedastheimmunoglobulinG3(IgG3)isotype,5wereIgG1.Westernblottingshowedthatonestrain(M2)reactedwith680002Dalton(68KD)proteinandfourstrainswith270002dalton(27KD)prote
7、in.BandofM4stainwasnotgotbywesternblotting.BrownparticleswereseeninmacrophagesandpneumocytesinautopsylungtissuesfromSARSpatients.ConclusionMonoclonalantibodieswemadewerespecifictotheSARS2CoV,andtheyhadbeenusedtodetectSARS2Co
