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《肝豆靈對(duì)銅負(fù)荷肝纖維化大鼠肝星狀細(xì)胞凋亡的影響-論文.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線(xiàn)閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、Websitehttp：／／xuebao．a(chǎn)htcm．edu．cnE—mailahxbbjb@163．com安徽中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)第33卷第2期2014年4月JANHUIUNIVCHINESEIVIEDVo1．33No．2Apr．201463肝豆靈對(duì)銅負(fù)荷肝纖維化大鼠肝星狀細(xì)胞凋亡的影響張娟，謝道俊，韓輝，沈斌。，鮑遠(yuǎn)程，童建兵，周磊，楊波，丁偉軍(1．安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，安徽合肥230031；2．湖北中醫(yī)藥大學(xué)，湖北武漢430065)[摘要]目的觀察肝豆靈對(duì)銅負(fù)荷肝纖維化大鼠肝星狀細(xì)胞(hepaticstellatecells，
2、HSC)凋亡的影響，探討肝豆靈防治Wilson病肝纖維化的作用機(jī)制。方法將75只大鼠分成空白組、模型組、肝豆靈組、青霉胺組及肝豆靈+青霉胺組，采用喂食硫酸銅飲食復(fù)制銅負(fù)荷大鼠模型，采用TuNEL法檢測(cè)HSC的凋亡。結(jié)果模型組可見(jiàn)大量HSC增生；與模型組比較，各治療組HSC數(shù)量顯著降低(P<0．01)，HSC凋亡指數(shù)顯著升高(P<0．01)；肝豆靈+青霉胺組AI顯著高于肝豆靈組和青霉胺組(P<0．01)。討論肝豆靈可促進(jìn)銅負(fù)荷大鼠HSC的凋亡，其與青霉胺聯(lián)合用藥的作用更顯著。[關(guān)鍵詞]肝豆?fàn)詈俗冃?；肝纖維化；銅負(fù)荷；肝星狀細(xì)胞；肝豆靈；青霉胺[
3、中圖分類(lèi)號(hào)]R575．24[文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A[DOI]IO．3969／j．issn．2095—7246．2014．02．023Wilson病(wilson’Sdisease，WD)作為銅代謝1．3試劑和藥物二氨基聯(lián)苯胺(diaminobenzi—障礙性疾病，其發(fā)生肝臟病變的根本原因是肝細(xì)胞dine，DAB)：北京中山生物技術(shù)公司；末端脫氧核苷中ATP7B酶功能缺陷，不能將多余的銅離子從細(xì)酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP缺口末端標(biāo)記(terminal胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)出去，造成游離銅在肝組織內(nèi)緩慢蓄積。dexynucleotidyltransferase(TdT)一
4、mediateddUTP肝臟是銅代謝的中心器官，過(guò)度沉積的銅損害肝細(xì)nickendlabeling，TUNEL)試劑盒：美國(guó)Roche公胞，引起肝細(xì)胞變性壞死、炎性改變及肝纖維化，臨司；硫酸銅：天津巴斯夫化工公司；肝豆靈成藥(院藥床表現(xiàn)為活動(dòng)性壞死后肝硬化或代償性肝硬變。研制字Z20050071)：每片0．3g，安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一究證實(shí)肝星狀細(xì)胞(hepaticstellatecells，HSC)的附屬醫(yī)院制劑室提供；陽(yáng)性藥物青霉胺(國(guó)藥準(zhǔn)字激活是肝纖維化發(fā)生的主要環(huán)節(jié)，激活的HSC大H31022286)：每片0．125g，上海信誼藥廠有限公
5、司量增殖，發(fā)生表型改變、分泌過(guò)多的細(xì)胞外基質(zhì)(ex—生產(chǎn)。tracellularmatrix，ECM)沉積于肝臟是肝纖維化形2方法成的關(guān)鍵[1]。WD肝纖維化引起的肝功能衰竭通常2．1模型復(fù)制和分組75只大鼠隨機(jī)分為5組，是WD患者死亡的主要原因。因此，重視對(duì)WD肝每組15只，分別為空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、肝豆靈纖維化的早期干預(yù)，對(duì)于改善WD患者的肝功能及組、肝豆靈加青霉胺組、青霉胺組。從實(shí)驗(yàn)第1天開(kāi)預(yù)后都具有十分重要的意義。本實(shí)驗(yàn)采用肝豆靈治始，除空白對(duì)照組予以普通飼料，其余4組均參照文療WD大鼠肝纖維化，旨在研究此方對(duì)HSC凋亡獻(xiàn)[2]復(fù)
6、制銅負(fù)荷大鼠模型，即給予含硫酸銅1g／kg的影響，以探討其治療WD肝纖維化的作用機(jī)制。的飼料和0．185硫酸銅的水，飼養(yǎng)12周。各組大1材料鼠每天每只進(jìn)食相等，并自由飲水。從第7周第11．1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)用清潔級(jí)Wistar大鼠75只，雌雄天開(kāi)始各治療組大鼠均予以相應(yīng)藥物灌胃。肝豆靈各半，月齡均為3個(gè)月，平均體質(zhì)量(200±20)g，購(gòu)組大鼠按受肝豆靈0．486g／kg(相當(dāng)于成人臨床用于南京醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可量的6．3倍)灌胃，肝豆靈加青霉胺組大鼠接受肝豆證號(hào)：SCXK(蘇)2008—0004。動(dòng)物房為普通級(jí)飼養(yǎng)靈o．486g
7、／kg和青霉胺0．09g／kg(相當(dāng)于成人臨室，實(shí)驗(yàn)前先適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。床用量的6．3倍)灌胃，青霉胺組大鼠僅接受青霉胺1．2主要儀器切片機(jī)(LeicaRM2135)：德國(guó)；切0．09g／kg灌胃，空白組和模型組大鼠接受等容量片漂烘儀(科力飛QP—B)：安徽合肥電子研究所；石生理鹽水灌胃。均每日1次，共6周。在第13周實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，共死亡大鼠26只，剩余49只，各組動(dòng)物蠟包埋機(jī)(亞光YB一7B)：湖北孝感；圖像采集及圖像分析系統(tǒng)：美國(guó)Bio—Rad生物儀器設(shè)備公司。禁食12h，在2戊巴比妥鈉腹腔麻醉下，分別留取血清、肝組織標(biāo)本。基金項(xiàng)目：國(guó)家自
8、然科學(xué)基金項(xiàng)目(81202692)；安徽高校省2．2指標(biāo)檢測(cè)采用TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡。級(jí)自然科學(xué)研究項(xiàng)目(KJ2012Z223)結(jié)果判定：胞質(zhì)棕黃色的細(xì)胞為HS
