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《臨床醫(yī)學畢業(yè)論文腦出血大鼠心肌組織炎性因子及熱休克蛋白表達的變化及扶正護腦膠囊的.doc》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、XX大學畢業(yè)論文腦出血大鼠心肌組織炎性因壬及熱休克蛋白表達的變化及扶正護腦膠囊的干預作用姓名：2014年6月25日作用【摘要】H的觀察腦出血大鼠心肌組織炎性因子及熱休克蛋白表達的變化及扶正護腦膠囊的干預作用。方法動物隨機分為假手術組、模型組、扶正護腦組和安宮牛黃組，分別于術后6、24、72h3個吋相點取材，采用免疫組織化學法檢測腫瘤壞死因子-a(TNF-a)>熱休克蛋白70(HSP70)的蛋白表達,通過圖像分析，測定IOD值。結(jié)果模型組各吋間點TNF?a、HSP70的IOD值均顯著升高，扶正護腦
2、組和安宮牛黃組均能明顯降低TNF-a的IOD值，升高HSP70的IOD值。結(jié)論炎性因子參與了腦出血誘發(fā)心肌損傷的機制，扶正護腦膠囊通過抑制炎性因子表達、增強熱休克蛋白表達而減輕心肌損傷。【關鍵詞】腫瘤壞死因子?血熱休克蛋白；扶正護腦膠囊；腦出血；動物模型Keywords:TNF-a；HSP70；FuzhengHunaocapsule；intracerebralhemorrhage；animalmodel研究發(fā)現(xiàn)，多種心血管疾病與炎癥反應有關，腫瘤壞死因子-a(TNF-a)是極具代表性的促炎細胞因
3、子。腦出血后機體處于應激狀態(tài),自身內(nèi)源性保護系統(tǒng)激活,熱休克蛋白70(HSP70)作為一種細胞內(nèi)源性保護蛋白，在防止應激引起的心肌細胞損害方面起著重要作用。本實驗通過觀察腦出血大鼠心肌組織TNF-a>HSP70表達水平的變化,探討炎性因子在腦出血誘發(fā)心肌損傷屮的病理生理機制以及機體內(nèi)源性的白我保護機制，并通過觀察扶正護腦膠囊的干預效果，為腦心綜合征的治療提供一種新的思路。1實驗材料1.1動物健康雄性Wistar大鼠，體重250?300g,河南省醫(yī)學科學院動物屮心提供。1.2主要儀器MetaMor
4、ph圖像分析軟件(美國UnivcralImagingCorporation)；普通光學顯微鏡(日本Olympus公司)；Spot-II型數(shù)碼相機(美國Diagnostic公司)；石蠟切片機(德國Leitzwetzlar公司)。1.3主要藥物與試劑即用型SABC免疫組化染色試劑盒、TNF?a、HSP70--抗均購自武漢博士德生物工程公司；PBS(0.01mol/L,pH7.2?74)、枸椽酸鹽緩沖液(0.01mol/L,pH6.0)、濃縮型DAB試劑盒和抗體稀釋液均為北京屮杉金橋生物技術有限公司產(chǎn)
5、品。扶正護腦膠囊系北京小醫(yī)藥大學東直門醫(yī)院重點實驗室屮藥化學組提供,0.50粒；安宮牛黃丸系北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠生產(chǎn),3g/丸。2實驗方法2」造模參照文獻［1］方法，即選用膠原酶加肝索聯(lián)合注射建立腦出血動物模型。大鼠術前8h禁食,不禁水，用0.3%戊巴比妥鈉(30mg/kg)腹腔注射麻醉。將大鼠俯臥位I古I定于腦立休定位儀上。取頭皮正屮切口，骨膜剝離器剝離骨膜,暴露前岡及冠狀縫,取前岡為原點，向右3mm、向后1mm、深度5mm為注射點,即為右側(cè)尾狀核,用牙科鉆鉆孔，微量注射器注射含
6、膠原酶(1U/pL)和肝素(7U/pL)的生理鹽水1gLo假手術組注射等量牛理鹽水。注藥后留針5min,退針縫合頭皮。手術動物蘇醒后，根據(jù)Bederson等［2］的評定方法，篩選造模成功的動物。2.2分組及給藥72只動物隨機分為假手術組（A組）、模型組（B組）、扶正護腦組（C組）和安宮牛黃組（D組），每組18只，分別于術后6、24、72h3個時相點取材，每個時相點6只動物。從術前11d開始灌胃，扶止護腦組劑量為1.35g/（kgd）,安宮牛黃組劑量為0.27g/（kgd）?假手術組和模型組分別予
7、等量的生理鹽水。第12日造模，手術前后療程2周。2.3標本采集及處理實驗動物麻醉后剖腹，迅速摘取活體心臟，從心尖部開始依次取材，分別投入電鏡固定液、4%屮性甲醛液，剩下的心室部分置于液氮屮保存待測。2.4心肌組織、腫瘤壞死因子和熱休克蛋白70蛋白表達的測定采用SABC法,具體操作步驟嚴格按說明書操作。2.5染色結(jié)果判斷及IOD值的測定TNF-a.HSP70免疫反應陽性物質(zhì)為棕黃色顆粒。在顯微鏡圖像采集系統(tǒng)下，每例切片隨機選取4個1mm2而積的視野，根據(jù)著色強度和陽性表達而積的綜合情況進行比較。采
8、用MetaMorph圖像分析軟件測定心肌組織陽性顆粒積分光密度（integratedopticaldensity,IOD）｛i□IOD為所測結(jié)構范圍內(nèi)陽性表達顆粒的總面積和平均吸光度值的乘積，它反映所測結(jié)構光密度與面積的綜合變化。2.6統(tǒng)計學方法所有數(shù)據(jù)均以x±s表示，用SPSS12.0統(tǒng)計分析軟件進行處理。組間比較采用方差分析，多元相關分析采用Pearson分析。3結(jié)果3.1各組不同吋間點腫瘤壞死因子?a積分光密度值比較（見表1）表1各組大鼠不同吋間點TNF-a積分光密度值比較（略）注：與B組
