DDP順鉑敏感性的研究-論文.pdf

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1、2013年6月第22卷第6期ProgObstetGvneco1．Jun．2013．Vo1．22．No．6·論著·TWEAK激活自噬增強(qiáng)上皮性卵巢癌順鉑耐藥細(xì)胞株A2780／DDP順鉑敏感性的研究王文文，邱麗華(上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院婦產(chǎn)科上海市教委重點學(xué)科上海市婦科腫瘤重點實驗室，上海200127)’【摘要】目的：觀察TWEAK對上皮性卵巢癌順鉑耐藥細(xì)胞株A2780／DDP的順鉑(DDP)耐藥性的影響，并初步探討其機(jī)制。方法：CCK8法測定不同濃度TWEAK刺激后A2780／DDP的順鉑半數(shù)細(xì)胞致死量(IC。)。Westernblot法檢測TWEAK刺激A2780／

2、DDP后Beclin—l、微管結(jié)合蛋白輕鏈3(LC3)及成纖維細(xì)胞生長因子誘導(dǎo)早期反應(yīng)蛋白14(Fn14)的表達(dá)水平。激光共聚焦顯微鏡檢測綠色熒光一LC3蛋白(GFP．LC3)在A2780／DDP細(xì)胞內(nèi)的分布情況。用TWEAK刺激敲除Fn14表達(dá)的A2780／DDP細(xì)胞，Westemblot法檢測Beclin-1、LC3的表達(dá)。結(jié)果：CCK8檢測結(jié)果顯示，10、lOOng／mlTWEAK組的順鉑IC50分別為(31．940+0118)g／ml、(28．769+0．090)g／ml，均顯著低于0nml組(36。3584-0．r06)g／ml(P均

3、lot法結(jié)果顯示，TWEAK可呈劑量和時間依賴性誘導(dǎo)Beclin一1、LC3及Fnl4表達(dá)上調(diào)，而特異性敲除Fnl4表達(dá)后，Beclin-1、LC3表達(dá)明顯下調(diào)。激光共聚焦顯微鏡檢測結(jié)果顯示，TWEAK可誘導(dǎo)GFP．LC3致密斑形成。結(jié)論：TWEAK可增強(qiáng)人卵巢癌細(xì)胞耐藥株A2780／DDP的順鉑敏感性；呈劑量和時間依賴性激活A(yù)2780／DDP的自噬活性，且主要通過與其受體Fnl4結(jié)合介導(dǎo)?！娟P(guān)鍵詞】TWEAK；Fnl4；小干擾RNA；自噬；卵巢癌；順鉑；耐藥中圖分類號：R737．33文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號：1004—7379(2013)06—0433一o4TWEAKact

4、ivateautophagyandenhancedthecisplasinsensitivityinovariancancercis．platinresistantcelllineA278o／DDP．ngWenwen，pih妣．DepartmentofObstetricsandGynecology，Re耐Hospital，ShanghaiJiaotongUniversitySchoofofMedicine，Shanghai200127【Abstract】Objective：T0observethecisplatinresistancedifferenceofovarianc

5、ancercelllineA2780／DDPTWEAK．treated．a(chǎn)ndinvestigatethepotentialmechanism．Methods：In．vestigatethedifferenceofcisplatinhalfcelllethaldose(IC)inA2780／DDPafterTWEAK(0．10，100ng／m1)stimulated24hoursbvCCK一8．TheexpressionofBeclin．1．LC3proteinandFnl4inTWEAK．treatedA2780／DDPbydifferentdoses(0。10．100n

6、m1)andtimepoints(0，12，24h)．TherepresentativeimagesofGFP—LC3purmtaformationEAK．inducedwasdetectedbylaserscanningconfocalmicroscopy．TheexpressionsofBeclin．1．LC3andFnl4weredetectedinA2780／DDPrEAK．treatedandtransfectedFnl4smallinterferenceRNA(siRNA—Fn14)toblockFnl4．Results：Withtheincreasingcon

7、centration(TWEAK0，10。lOOng／m1)。A2780／DDPcisplatinIC(36．358±0．106。31．9404-0．1l8，28．769．4-0．090ml，respectively)weregraduallyreduced．Thedifierencesbetween0ng／mland10n【g／mlor100ng／m1werestatisticallysignificant(P<0．05)．TheexpressionsofBeclin．1。LC3andFnl4inTWEAK—tr