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《鑒別豬偽狂犬病病毒強毒與疫苗毒雙重PCR檢測方法的建立-論文.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、華北農(nóng)學(xué)報·2014，29(2)：94—97鑒別豬偽狂犬病病毒強毒與疫苗毒雙重PCR檢測方法的建立顧陽，高曉云，程琨2，潘鑫龍，崔保安，陳紅英(1．河南農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)工程學(xué)院，河南鄭州450002；2．河南農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，河南鄭州450002)摘要：根據(jù)豬偽狂犬病病毒(PRV)gE、g日基因序列，設(shè)計合成了2對特異性引物，分別建立g和g日基因的單項PCR擴增方法。通過對PCR擴增條件的優(yōu)化，建立了鑒別PRV強毒和疫苗毒的雙重PCR檢測方法，即利用一次PCR反應(yīng)，從強毒株基因組中可同時擴增出2
2、條大小分別為429bp(gE基因)、355bp(gH基因)的特異性片段，從弱毒株DNA中僅擴增出1條大小為355bp的片段，而豬圓環(huán)病毒2型和豬細小病毒DNA擴增結(jié)果均為陰性。敏感性試驗表明，所建立的雙重PCR檢測方法最低有效檢測量為1×10TCID／0．1mL。該方法適合對PRV強毒和疫苗毒的快速鑒別診斷。關(guān)鍵詞：偽狂犬病毒；雙重PCR；檢測；強毒株；疫苗株中圖分類號：$828文獻標識碼：A文章編號：1000—7091(2014)02一O094—04DevelopmentofDuplexPCR
3、MethodfortheDiferentiationofVirulentandVaccineStraiUSofPseudorabiesVirusGUYang，GAOXiao—yun，CHENGKun。，PANXin．1ong，CUIBao．a(chǎn)n，CHENHong—ying(1．CollegeofAnimalScienceandVeterinaryMedicine，HenanAgriculturalUniversity，Zhengzhou450002，China；2．CollegeofLifeSc
4、ience，HenanAgriculturalUniversity，Zhengzhou450002，China)Abstract：BasedonthegEandgHgenesofpseudorabiesvirus(PRV)，twopairsofspecialprimerswerede—signed，respectively，singlePCRassaysforgEandgHgeneswereestablished．Undertheoptimizedamplificationconditions，
5、theduplexPCRmethodwasestablishedtodifferentiatevirulentandvaccinestrainsofpseudorabiesvi—rus．InaduplexPCRassay，twofragmentsof429bpforgEgeneand355bpforgHgeneweresimultaneouslyam—plifiedfrompseudorabiesvirusvirulentstrainsDNA，onlya355bpfragmentforgHgen
6、ewasamplifiedfrompseud-orabiesvirusvaccinestrainsDNA，whereasnoPCRproductswereamplifiedfromporcinecireovirustype2andpor-cineparvovirus．ThenthedetectionlimitofduplexPCRwasestimatedtobe1×10TCID5o／0．1mL．Thismethodissuitablefordifferentiationofwild-typeps
7、eudorabiesvirusandvaccinestrainsinclinicalspecimen．Keywords：Pseudorabiesvirus；DuplexPCR；Detection；Virulentstrains；Vaccinestrains偽狂犬病(Pseudorabies，PR)是由偽狂犬病病毒對養(yǎng)豬業(yè)造成了重大的經(jīng)濟損失。(Pseudorabiesvirus，PRV)引起的多種家畜(豬、牛、對于PR的防制主要依靠自然弱毒疫苗及基因羊等)和野生動物以發(fā)熱、奇癢(豬除外)及神經(jīng)系
8、工程缺失疫苗的廣泛應(yīng)用，可使豬免于發(fā)病，但不能統(tǒng)癥狀和腦脊髓炎為主要特征的一種重要傳染阻止野毒的潛伏感染。此外，常規(guī)的血清學(xué)檢測方病l_lJ。豬是該病毒重要的貯存宿主和傳染源。自法無法區(qū)分疫苗免疫豬和野毒感染豬J。目前，從2012年下半年以來，我國PR發(fā)病率明顯上升，PRV的檢測方法主要有病毒分離鑒定、ELISA血清收稿日期：2013—10—09基金項目：河南省重大科技項目(111100110300)作者簡介：顧陽(1991一)，女，河南淅川人，在讀碩士，主要從事分子免疫學(xué)和分子病毒學(xué)研究。通訊
