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《馬鈴薯帚頂病毒RT-LAMP檢測(cè)方法的建立-論文.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、2014年第5期植物檢疫PLANTQUARANTINEVo1．28No．5馬鈴薯帚頂病毒RT—LAMP檢測(cè)方法的建立丁小蘭趙竹馬占鴻張永江何增磊李明?！?1．中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)與生物技術(shù)學(xué)院北京100193；2中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院)DetectionofPotatomop-topvirusbyreversetranscriptionloop·mediatedisothermalamplification．DingXiaolan，ZhaoZhu。，MaZhanhong，ZhangYongjiang，HeZenglei，LiMingfu2(1．C
2、hinaAgriculturalUniversityBeijing100193China；2．ChineseAcademyofInspectionandQurantine)AbstractPotatomop-topvirus(PMTV)isoneofthemostimportantpathogensofpotatoes．Inthisstudy，areversetranscriptionloop-mediatedisothermalamplification(RT-LAMP)methodwasdevelopedforthedetectionof
3、PMTV．ThreeprimersetsweredesignedbasedonthehighlyconservedregionoftheTGBsequenceofPMTV．Aftertheoptimizationofprimersandreactionconditions，theRT-LAMPmethodwasspecificandsensitiveindetectingPMTV，thereactionwas100timesmoresensitivethanPCR．Thedetectionresultcanbejudgedbyvisualob
4、servationofturbidityOrcolorreactionwithoutcomplexequipments．ThisstudywillprovidearapidandsensitivediagnosticmethodtodistinguishPMTVinpotato．KeywordsPotatomop—topvirus；RT-LAMP；detection摘要馬鈴薯帚頂病毒(Potatomop—topvirus，PMTV)是馬鈴薯上的重要病毒之一。本研究利用逆轉(zhuǎn)錄環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)，建立了PMTV的RT-LAMP檢測(cè)方法。根據(jù)PMT
5、V高度保守的TGB序列設(shè)計(jì)了3組引物，進(jìn)行引物篩選和條件優(yōu)化。建立的RT-LAMP檢測(cè)方法特異性強(qiáng)、靈敏度高，比PCR靈敏度高100倍，并可通過(guò)肉眼觀察濁度或顏色反應(yīng)進(jìn)行結(jié)果判斷。本研究為PMTV的檢測(cè)提供了快速、靈敏的檢測(cè)方法。關(guān)鍵詞馬鈴薯帚頂病毒；逆轉(zhuǎn)錄環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)；檢測(cè)中圖分類(lèi)號(hào)S41．30馬鈴薯帚頂病毒(Potatomop-topvirus，PMTV)州、江西、浙江、云南、甘肅等地均有報(bào)道[3】。由于屬于帚狀病毒科(Hrgaviridae)馬鈴薯帚頂病毒屬PMTV可以在馬鈴薯粉痂菌的休眠孢子中保持長(zhǎng)(Pomovirus1，主要分
6、布在愛(ài)爾蘭、丹麥、芬蘭、挪時(shí)間的侵染力以及目前缺少有效的抗病品種，該威、荷蘭、英國(guó)、捷克、日本、美國(guó)和加拿大等國(guó)家病毒病很難被控制_1]。近年來(lái)，我國(guó)多次從馬鈴?薯起源中心地區(qū)如秘魯、智利等引進(jìn)馬鈴薯品種。PMTV嚴(yán)重影響馬鈴薯的產(chǎn)量和品質(zhì)，受侵染的馬鈴薯塊莖產(chǎn)生環(huán)狀或弧狀壞死，由病薯長(zhǎng)資源，也從荷蘭、英國(guó)、美國(guó)等馬鈴薯產(chǎn)業(yè)強(qiáng)國(guó)引成的馬鈴薯植株表現(xiàn)出帚頂、奧古巴花葉和褪綠進(jìn)種薯、組培苗，PMTV傳入風(fēng)險(xiǎn)大，若其一旦傳v型紋等癥狀[21。鑒于PMTV的嚴(yán)重危害，我國(guó)入國(guó)內(nèi)，將會(huì)給我國(guó)馬鈴薯產(chǎn)業(yè)造成巨大損失，必將其列入《中華人民共和國(guó)進(jìn)境植物檢疫
7、性有害須引起重視。生物名錄》。針對(duì)PMTV的檢測(cè)，己建立的方法有ELISAt鍆RT-PCR~”P(pán)MTV可隨病薯塊或組培苗通過(guò)運(yùn)輸遠(yuǎn)距、、實(shí)時(shí)熒光RT-PCR【、基因離傳播，在田間可以通過(guò)土壤中的馬鈴薯粉痂菌芯片等。LAMP技術(shù)是日本學(xué)者NotomiT等(Spongosporasubterranea)近距離傳播。該病毒于2000年開(kāi)發(fā)的-~o0新型的核酸擴(kuò)增方法[8]，具的傳播介體馬鈴薯粉痂菌在我國(guó)內(nèi)蒙古、廣東、貴有簡(jiǎn)便、快速、特異性強(qiáng)等特點(diǎn)，已用于感染人類(lèi)基金項(xiàng)目：國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(2011B466r)通訊作者：E-mail：
8、limf9@sina．tom收稿日期：2014—03—20·59·2014年第5期植物檢疫PLANTQUARANTINEVo1．28No．5及動(dòng)植物的細(xì)菌、真菌、寄
