兔關(guān)節(jié)軟骨撞擊損傷的動物模型的建立及評價-論文.pdf

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1、哩醫(yī)，藥雜志2014年7月第43卷第l4期ShanxiMedJ，July2014，Vo1．43，No．14·基礎(chǔ)研究·兔關(guān)節(jié)軟骨撞擊損傷的動物模型的建立及評價高宏關(guān)節(jié)軟骨損傷因其早期發(fā)病隱匿，不易發(fā)現(xiàn)，1．4．1實驗?zāi)Ｐ偷慕ⅲ河?水合氯醛(1．25病理標(biāo)本不易獲得，臨床早期診斷困難，在人群中mL／kg)兔腹腔內(nèi)注射麻醉后，仰臥位，雙膝關(guān)節(jié)脫研究有一定難度，而使用動物模型則可以采用多種毛，常規(guī)消毒鋪巾，兔膝關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)縱形切口，長約3有效手段，按研究的需要進(jìn)行全過程的觀察，并可cm，依次切開皮膚、皮下組織、關(guān)節(jié)囊后，將兔髕骨采取相應(yīng)的措施控制偏倚因素。因此，動物模型可外翻，膝關(guān)節(jié)屈曲12O。，

2、使股骨干呈90。，骨盆固定以作為研究關(guān)節(jié)軟骨損傷重要而有效的手段。有帶固定骨盆，大腿固定帶固定大腿，用1．33kg和學(xué)者采用撞擊的方法建立兔膝關(guān)節(jié)軟骨損傷動物0．43kg撞擊物分別從46cm和2Ocm高處通過導(dǎo)模型，操作簡單，與人類關(guān)節(jié)軟骨損傷的病變過程桿墜落，通過直接撞擊體撞擊股骨內(nèi)側(cè)髁，造成股基本相似，具有良好的可比性，并可同期獲得同一骨內(nèi)側(cè)髁軟骨的不同的損傷撞擊。我們實驗室前實驗動物正常膝關(guān)節(jié)滑液的標(biāo)本，是很好的動物實期進(jìn)行大體觀察和組織學(xué)觀察，證實所采用的質(zhì)量驗?zāi)Ｐ?。本研究旨在驗證該動物模型的可靠性、可和撞擊的強度適中，沒有造成軟骨下骨折，是較為操作性和可重復(fù)性，以保證后續(xù)實驗的準(zhǔn)

3、確性，提理想的研究創(chuàng)傷性骨關(guān)節(jié)炎病理改變與發(fā)病機(jī)制高實驗結(jié)果的可信度，為進(jìn)一步研究關(guān)節(jié)軟骨損傷的動物模型。的發(fā)病機(jī)制打下基礎(chǔ)和治療提供理論依據(jù)。1．4．2關(guān)節(jié)的大體觀察：觀察撞擊后軟骨面的平1材料與方法整度，是否有關(guān)節(jié)面的裂隙和軟骨剝脫現(xiàn)象，矢狀1．1試劑與儀器面剖開股骨內(nèi)側(cè)髁，觀察斷面軟骨下骨有無骨折。Lieca切片機(jī)(德國Leica公司)；Hitachi一6001．4．3組織學(xué)觀察：取股骨內(nèi)側(cè)髁，行矢狀面剖透射電鏡(Et本Hitachi公司)；顯微攝影儀(日本開，一半立即放入4的中性甲醛溶液中固定24OlympusAU一8O)。h，固定完成后，放入1O的中性乙二胺四乙酸1．2實驗動物(

4、EDTA)溶液中，在0℃下脫鈣4周，每日攪拌，每實驗動物選用四川I大學(xué)華西醫(yī)院動物實驗中周更換2次脫鈣液，使其充分脫鈣，用針刺法判定心提供的健康成年新西蘭大白兔6只，體質(zhì)量在脫鈣終點，梯度脫水1周，干燥后石蠟包埋組織塊，3．0～3．5kg，雌雄不限。試驗前在籠子內(nèi)圈養(yǎng)1切成5m的病理片，再經(jīng)系列的二甲苯、梯度濃度周，觀察無明顯疾患、無關(guān)節(jié)運動異常者方可納入酒精脫水，蘇木素染色10min，分色，固定后伊紅染本實驗。實驗用飼料由華西醫(yī)院動物中心提供。6色5min，徹底沖洗，再由低到高的梯度嘗試酒精和只新西蘭白兔，雙側(cè)行關(guān)節(jié)腔暴露，右側(cè)做低能量二甲苯脫水，干燥，透明，上膠，封片行顯微鏡檢查。(0

5、．6J)的撞擊，左側(cè)做高能量(6．3J)的撞擊。股骨的另一半標(biāo)本用刀片修整后，2．5戊二1．3損傷裝置醛固定24h，1鋨酸固定2h后，乙醇逐級脫水，放置兔的底盤、固定支架、骨盆固定帶、大腿固醋酸異戊酯置換酒精，二氧化碳臨界點干燥，鍍金，定帶垂直導(dǎo)桿，質(zhì)量分別為1．33kg和0．43kg的Amrayq000B掃描電鏡觀察并照片。撞擊物，直接撞擊體(為了保證兔股骨內(nèi)側(cè)髁軟骨2結(jié)果受力的均勻一致，應(yīng)用骨水泥按照股骨內(nèi)側(cè)髁的解2．1大體觀察：高能量組和低能量組標(biāo)本關(guān)節(jié)軟剖形態(tài)塑形而成)。骨表面光滑光潔，呈白色半透明狀，未見關(guān)節(jié)表面1．4方法裂隙，軟骨質(zhì)韌有彈性，剖面軟骨和軟骨下骨完整，無裂隙，軟骨

6、下骨與軟骨的界限清楚，見圖1，2?；痦椖浚荷轿魇⌒l(wèi)生廳科研課題(201301082)2．2蘇木素一伊紅(HE)染色組織學(xué)觀察：6個低能作者單位：030001太原，山西醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院骨科量撞擊的標(biāo)本中，軟骨無裂隙，細(xì)胞層次結(jié)構(gòu)清晰，山西醫(yī)藥雜志2014年7月第43卷第l4期ShanxiMedJ，July2014，Vo1．43，．!淺表層的細(xì)胞扁平，與關(guān)節(jié)軟骨的表面平行排列，在活體內(nèi)進(jìn)行的關(guān)節(jié)軟骨損傷的動物模型由中間層的細(xì)胞較大而圓，輻射層的細(xì)胞呈柱狀排于可以觀察關(guān)節(jié)軟骨損傷后長期的病理改變，所以列，垂直于軟骨表面，鈣化層緊靠貼軟骨下骨，未見在研究中常用，分為開放關(guān)節(jié)損傷和閉合關(guān)節(jié)損傷骨折

7、線，見圖3。6個高能量撞擊的標(biāo)本中，軟骨細(xì)模型。為了保證作用于關(guān)節(jié)軟骨表面撞擊力的均胞層次清晰，鈣化層和軟骨下骨均未見斷裂，軟骨勻一致，往往先做一個與實驗動物關(guān)節(jié)面相匹配的的淺表層可以看到走行斜行的裂隙，裂隙未穿過軟撞擊體，這種實驗結(jié)果與臨床關(guān)節(jié)軟骨損傷結(jié)果十骨下骨，見圖4。分相似。Zhang等和Vrahas等應(yīng)用預(yù)前制作2．3掃描電鏡觀察：6個低能量撞擊的標(biāo)本中，軟與兔股骨內(nèi)側(cè)髁相吻合的撞擊體研究暴露關(guān)節(jié)腔骨表面光滑，