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《豬流行性腹瀉病毒分離鑒定與實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)方法的建立-論文.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2014，35(8)：31—35ProgressinVeterinaryMedicine豬流行性腹瀉病毒分離鑒定與實(shí)時(shí)熒光定量RT—PCR檢測(cè)方法的建立唐金明。，陳書琨，林慶燕，黃新亞。，盧體康，孫潔，阮周曦，曾少靈，祁振強(qiáng)，呂建強(qiáng)，楊俊興，曹琛福，張彩虹，劉建利，廖立珊，花群義，秦智鋒¨(1．深圳出入境檢驗(yàn)檢疫局，廣東深圳518045；2．華南農(nóng)業(yè)大學(xué)，廣東廣州510642；3．湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)，湖南長(zhǎng)沙410000；4．深圳市寶舜泰生物醫(yī)藥股份有限公司，廣東深圳市518001)摘要：采用Vero-76細(xì)胞系從臨
2、床樣品小腸內(nèi)容物中分離到1株豬流行性腹瀉病毒(PEDV)，通過RT-PCR進(jìn)行了鑒定。針對(duì)PEDV，參照保守的M基因序列設(shè)計(jì)了特異性引物和探針，建立了針對(duì)PEDV特異性的實(shí)時(shí)熒光定量RT_PCR檢測(cè)方法(PEDV-rRT—PCR)。所建立的方法特異性強(qiáng)，與傳染性胃腸炎病毒、輪狀病毒、豬細(xì)小病毒等豬主要病原體無交叉反應(yīng)；方法靈敏度高，檢測(cè)靈敏度達(dá)到重組質(zhì)粒1O稀釋度(約20cop)；重復(fù)性好，組內(nèi)變異系數(shù)≤0．26。20份田間樣品檢測(cè)結(jié)果表明，所建立的PEDV-rRT—PCR方法快速、靈敏，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠，適合用于PEDV的
3、快速檢測(cè)和流行病學(xué)調(diào)查。關(guān)鍵詞：豬流行性腹瀉病毒；病毒分離；實(shí)時(shí)熒光定量RT—PCR中圖分類號(hào)：$852．28；$852．659．6文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1007-5038(2014)08—0031—05豬流行性腹瀉(Porcineepidemicdiarrhea，個(gè)州，造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。PEDV與豬傳染性PED)是由豬流行性腹瀉病毒(Porcineepidemicdi—胃腸炎病毒(Transmissiblegastroenteritisvirus，arrheavirus，PEDV)引起的一種急性、高度接觸性TGEV)
4、、輪狀病毒A(RotavirusgroupA，Rota—A)腸道傳染病，主要臨床表現(xiàn)為腹瀉、嘔吐、脫水和哺感染后所引起的臨床癥狀相似，臨床難以鑒別診斷，乳仔豬高致死率。PED呈世界范圍性流行，1971年給疾病的確診、治療和防控帶來了很大困難，給養(yǎng)豬在英國(guó)和比利首次報(bào)道，此后加拿大、匈牙利、德國(guó)、業(yè)造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失。日本及韓國(guó)等多個(gè)國(guó)家都報(bào)道了該病的發(fā)生。中國(guó)2013年，從規(guī)?；B(yǎng)豬場(chǎng)采集2O多份臨床樣于1976年首次報(bào)道PED_1]。最近幾年，PED危害品，采用Vero-76細(xì)胞系分離出了1株P(guān)EDV，并通性進(jìn)一步加大，流行
5、呈明顯上升趨勢(shì)口_3]。從2010過RT—PCR方法和測(cè)序?qū)ζ溥M(jìn)了鑒定。為建立年春季至今，我國(guó)的很多省份、泰國(guó)、菲律賓、韓國(guó)及PEDV的快速檢測(cè)方法，采用實(shí)時(shí)熒光定量RT-美國(guó)等國(guó)家的規(guī)模化豬場(chǎng)暴發(fā)嚴(yán)重的豬流行性腹瀉PCR(real-timeRT—PCR，rRT—PCR)技術(shù)建立一種疫情。2013年，豬流行性腹瀉病毒已蔓延美國(guó)13能快速、靈敏、準(zhǔn)確檢測(cè)PEDV的實(shí)時(shí)熒光定量RT一收稿日期：2013-12—27基金項(xiàng)目：深圳市技術(shù)創(chuàng)新計(jì)劃資助項(xiàng)目(CXZZ2013032o154210829)作者簡(jiǎn)介：唐金明(1986一)，男，
6、湖南永州人，助理獸醫(yī)師，碩士，主要從事動(dòng)物疫病檢測(cè)工作。*通訊作者崠豢米DevelopmentandApplicationofSemi-nestedPCRforOrfVirusDetectionDENGYu(SchoolofAnimalScience，XichangCollege，Xichang，Sichuan，615013，China)Abstract：AceordingtothesequenceofFILgeneofOrfvirusinGenBank，threeprimersweredesignedandsynthesi
7、zed．Asemi—nestedPCRassayfordifferentiatingOrfvirus(ORFV)，sheeppoxvirus(SPV)andgoatpoxvirus(GPV)wasdeveloped．The450bpDNAfragmentwasamplifiedinORFVXC13strain，butnobandswereamplifiedwithtemplatesextractedrespectivelyfromSPV，GPVandavianpoxvirus．Sensi—tivityofthesemi—ne
8、stedPCRassaywas3．64×10copies／／,LORFV．Intherepeatabilitytestandthefieldtrail，thesemi—nestedPCRassaycouldbeusedasamethodforthedetectionandmolecular
